文档介绍：论文题目:雄邀塞韭筮戆性前到腿疸细胞雄邀塞受佳塑基固鲍簋选塑初生鉴定答辩委员会主席:陵验(逝、江太堂医堂院随届箍二医院2答辩委员会成员:但崖(逝江省医堂型堂院2陈功鲎(逝江太堂医堂院随届箍三医院2论文答辩日期:万方数据温州医科大学硕士学位论文目录中文摘要??????????????????????3英文摘要???????????????????????????5前雷???????????????????????????????..7材料与方法????????????????????..11结果???????????????????????.28;口木???????????????????????????????‘V分析与讨论????????????????????一35小结???????????????????????????..37参考文献?????????????????????一38附录???????????????????????.40致谢???????????????????????.41综述及参考文献???????????????????42独创性声明????????????????????,将其传代于多个15cm培养皿,待生长至约60%时换液培养,72h后加入10nMDHT,24h后收集细胞,使用抗雄激素受体抗体进行染色质免疫共沉淀实验,富集得到雄激素受体结合位点。实时荧光定量PCR检测富集物中PSA基因的相对含量并计算其相对富集度以判断AR-ChlP实验效率。对ChIP富集物进行高通量测序分析,将质控合格的测序结果与参考基因组比对,比对上唯一位置的序列用于后续(peak峰相关基因分析、GO分析等)标准信息分析及个性化分析。选择PTGER3、FOXP2、FNl、ZNF438、PDE9A、BDNF、PCDHl5基因作进一步验证与研究:收集去势培养72h+10nMDHT处理后Oh、3h、6h、9h、24h、,。%,,富集物中染色质片段主峰小于500bp。将测序结果cleandata与Hgl9序列进行比对,比对到参考基因组唯一位置的reads为10056037条,%。唯--LL对reads在各基因功能元件上的分布为:%,%,%,%,%。使用MACS软件进行peak区扫描,共得到2876个peak(p—value<le-05),peak平均长度为673bp,Peak在各基因功能元件上的分布特征与唯一比对reads的分布类似。将peak序列定位到基因组,共有1865个靶基因,其中foldenrichment≥10的基因有425个。对peak相关基因进行GO分析发现与细胞、细胞成分、细胞过程、结合、细胞器相关的基因位列前五;对peak相关基因进行pathway分析发现与基底粘附、代谢途径、癌症中的转录错误调节、嘌呤代谢等信号通路相关的靶基因占大多数。与DHT刺激0h相比,DHT刺激可改变7个AR靶基万方数据温州医科大学硕士学位论文因在LNCaP-AI细胞和LNCaP细胞中的表达,且随着DHT刺激时间的延长,表达差异越明显。各靶基因的相对表达量在两株细胞间均具有差异,与LNCaP细胞相比,表达升高的基因为PTGER3、FNl、ZNF438、FOXP2和PDE9A,表达降低的基因为BDNF和PCDHl5。结论染色质免疫共沉淀联合高通量测序技术能够筛选到前列腺癌雄激素受体信号通路基因,为进一步研究雄激素依赖性前列腺癌向非依赖性前列腺癌发展的过程中雄激素受体及其调控的靶基因功能起着至关重要的作用。关键词染色质免疫共沉淀,前列腺癌,雄激素非依赖,雄激素受体,靶基因4万方数据温州医科大学硕士学位论文TheScreeningandIdentificationofAndrogenReceptorTargetGenesinAndrogen-independentProstateCancerCellAbstractobjectiveToscreenandidentifytheandrogenreceptordownstreamtargetgenesinandrog