文档介绍：河北医科大学
博士学位论文
PKC抑制剂对蛛网膜下腔出血性脑血管痉挛的防治作用及分子机
制的实验研究
姓名:刘力强
申请学位级别:博士
专业:外科学
指导教师:张庆俊
种萍炼灾胪は虑怀鲅P阅匝9芫仿蔚防治作用及其分子机制的实验研究产物ㄑ鹾涎:斓鞍缀虯匝9鼙诘淖饔谩⒁谎趸G蜲肽谄摘要脑血管痉挛琧嵌隽鲂灾胪は虑怀鲅,严重和常见的并发症,也是患者致死致残的主要原因。尽管先前对笥辗⒛匝9芫仿蔚囊蛩厝缪P“迨放产物巧ò贰⒀9芙粽潘亍⒍璺影贰⒓乩胱拥、红细胞分解素之间的失平衡以及离子通道障碍对平滑肌细胞的影响等等进行了大量研究,但是导致脑血管平滑肌持续的收缩的主要原因以及炎性反应在脑血管痉挛的形成中分子机理并不完全清楚,特别是维持平滑肌收缩的蛋白激酶琍陀胙仔砸蜃幼B加泄氐暮艘蜃樱琋瓸诰仿蔚哪匝9鼙浠媛珊拖嗷ス系也亟待研究。为此,我们采用家兔枕大池二次注血脑血管痉挛模型,从器官组织水平、细胞水平以及分子生物学水平等不同层面对甂认赴蜃踊钚缘谋泶锉浠醒芯浚倍訮抑制多肽乐鼓匝9芫仿巫饔媒衅兰郏竽匝9芫仿蔚姆乐翁峁├砺垡谰荨1狙芯糠治R韵挛宀糠郑彝谜泶蟪囟巫⒀DP突锥龅墓饩导暗缇笛芯本研究目是观察实验性家兔二次枕大池注血模型基底动脉形态学及超微结构变化,为研究姆⑸坪涂凸燮兰鄹稍ご胧┑男Ч提供形态学资料。雄性中国白兔只,。实验组动物在和时经枕大池二次注射自体动脉血/直鹩贒次注血前巫⒀:天和保魅只动物经主动脉ザ嗑奂兹┝酸盐缓冲液灌注沽ξ处死,迅速开颅取出含有基底动脉全长的脑干及脑组织,截取上基底动脉,经ザ嗑奂兹┤芤涸俟潭小时,石蜡包埋,连续切片,层厚漳舅匾羏中文摘要虸
⒙硭扇旧’,供光镜观察,并测量管腔内径周长和管壁厚度:截取的另外基底动脉置于%戊二醛磷酸盐缓冲液中后固定小时,环氧树脂包埋,超薄切片,醋酸铀一枸橼酸铅染色供透射电镜鄄臁光镜观察:对照组动物的基底动脉旧允咀橹构正常,基底动脉外膜胶原纤维较薄,平滑肌细胞层细胞外基质很难观察到。实验组动物、和对照组无明显差别,时出现管径变细,内膜出现皱褶、平滑肌细胞肥大、扭曲变形,可见平滑肌细胞外基质,外膜胶原纤维明显增多变厚且有粒细胞和单核细胞浸润;时基底动脉管径狭窄更为明显,内皮细胞出现破损,平滑肌细胞除肥大、扭曲变形外,出现细胞间隙增宽和部分平滑肌细胞坏死,平滑肌细胞层细胞外基质明显增多,并出现中层和外膜分离,外膜胶原纤维进一步增多增厚,炎性细胞浸润更为明显,且向平滑肌层侵润;龉径狭窄程度较时减轻,内皮仍有皱折破损现象,平滑肌细胞的肥大、扭曲变形稍有缓解,有细胞间隙增宽和部分平滑肌坏死,平滑肌细胞层细胞外基质增生较时有缓解,仍有中层和外膜分离现象,外膜炎性细胞浸润有减轻,但仍有外膜胶原纤维增生:锥管径基本恢复,内皮仍有少量破损,平滑肌层细胞间隙轻度增宽和少许平滑肌细胞坏死,外膜炎性反应基本消失,胶原纤维增生基本缓解。电镜观察:对照组动物基底动脉结构正常。、仅有轻度内皮细胞空泡变性。出现内皮细胞变性,胞核电子密度降低,胞浆内线粒体肿胀,粗面内质网扩张,内弹力层增厚,疏密不均,中膜增厚,平滑肌胞核染色质密度略底,可见线粒体肿胀,胞膜不清,外膜可见纤维母细胞样变。时内皮细胞脱落严重,胞核出现严重脱颗粒,线粒体空泡变性明显,细胞器减少,紧密连接基本开放,平滑肌细胞可见坏死,空泡变性明显,胞核不规则,可见固缩,外膜可见纤维母细胞增生。杂心谄は赴崖洌擞型芽帕8谋洌械姆⑸趟酰实子密度降低,有空泡变性,紧密连接多处开放,平滑肌细胞出现变性,胞核有脱颗粒,线粒体变性,外膜胶原纤维成束状,有空泡变性,炎性细胞浸润减轻。蹦谄は赴技崖洌张荼湫陨偌交∠胞核密度基本恢复,胞浆电子密度略低,外膜改变基本恢复。中文摘要
结果表明家兔枕大池二次注血模型基底动脉在时出现轻度内皮细胞空泡变性,背鱿置飨缘男翁Ц谋洌ǘ龉芮幌琳内皮细胞损伤和平滑肌细胞坏死及外膜胶原纤维增生、炎症细胞浸润等,时最为明显。其病理改变与文献报道人类痉挛动脉极其相似。彝谜泶蟪囟巫⒀DP突锥鯬变化规律的研究第一部分韵研究结果发现枕大池二次注血引起的脑血管持续痉挛可导致平滑肌细胞变性坏死。有资料表明募せ钣肫交〉氖账密切相关。为此,本研究目的是研究诩彝枚巫⒀DP椭芯仿的基底动脉中表达和活性的变化规律,探讨谀匝9芫仿涡纬苫制中的作用。雄性中国白兔只,体重~,分为对照组和实验组。实验组动物在和时经枕大池二次注射自体动脉痥,分别于、巫⒀G、次注血后天和保魅只动物各组动物用***/快速推注,断头处死。迅速开颅取含有基底动脉全长的脑干及脑组织,浸入冰浴的小S诮馄氏晕⒕迪陆厝∩/位锥觯%多聚甲醛溶液内固定小时,石蜡包埋,连续切片,层厚τ妹疫组化测定谋泶铮捎没6ɡ砉ご笱枷穹治鱿低砎自动分析记录粜悦婊俜直龋唤硗/位锥