文档介绍：碱性磷酸酶的提取及其比活性测定带教:张学礼、戴薇薇龚张斌、黎志萍*材料选择细胞的破碎分离纯化鉴定*碱性磷酸酶(ALP,AKP)Alkalinephosphatase*一、实验目的1、掌握以有机溶剂分离技术提取蛋白质及酶的原理和方法;2、掌握酶蛋白纯化过程中的活性、比活性、得率及纯化倍数的概念及计算;3、了解AKP的临床意义及纯化蛋白质的一般方法。*二、实验原理1、AKP概述①催化有机单磷酸酯水解,并有转移磷酸基的作用②最适pH:~③特点:特异性低*④体内位置:细胞膜表面-肾小管的筛状缘-肠粘膜的微绒毛-胆小管的细胞膜缘-肝窦状腺表面-胎盘合体细胞滋养层细胞外表面*⑤正常血清:ALP主要来自肝(或胆管)和骨骼,约各占总活性的一半。⑥临床意义:血清ALP活力增高常见于-肝胆疾病(胆道阻塞等)-骨骼疾病(佝偻病等)-甲状腺功能亢进-妊娠和生长期儿童*2、AKP的分离、提取、及纯化整个制备过程可分为5个阶段:①材料的选择和预处理,②细胞的破碎,③提取,④纯化(包括盐析、有机溶剂提取、层析、电泳等),⑤浓缩、干燥及保存。*①取材取酶含量丰富、容易提取、新鲜的组织本次实验:肝脏*②生物组织与细胞的破碎机械破碎法:高速组织捣碎机、匀浆器、研钵渗透破碎法:低渗条件使细胞溶胀而破碎反复冻融法:超声波法:超声波震荡器使细胞膜上所受张力不均而使细胞破碎酶法:如用溶菌酶破坏微生物细胞*