文档介绍：郑州大学
硕士学位论文
X-连锁迟发性脊椎骨骺发育不良的分子遗传学研究
姓名:高超
申请学位级别:硕士
专业:儿科学
指导教师:周建华;罗强
20030420
连锁迟发性脊椎骨骺发育不良的分子遗传学研究中文摘要一。。,囊蓦譬孥篓堡矍燕曼堕差烹雳曼熙鐾于蹶儆ゅ研究生高超导师周建华罗强郑州大学第一附属医院儿科妨俜⑿约棺倒趋糠⒂涣且恢种饕@奂凹棺底堤搴蜕硖宄兄卮蠊亟冢哂懈叨纫糯熘市的骨软骨发育不良。临床表现为短躯干性侏儒,严重者可引起脊柱活动受限和脊柱侧弯,身体近端承重大关节饕@奂镑殴亟出现退行性骨关节炎,伴有颈短、肩峰高耸和桶状胸;呒觳榭杉堤迤毡楸浔猓堤迩安可舷略蛋枷荨⒅后部呈驼峰状突起和椎间隙狭窄等改变。是缘セ蛞糯ú。性发病;女性携带致病基因,一般表型正常。报告了几十个不同种族来源的家系。年—韧ü析将基因定位到旧宥瘫墼抖恕K婧蟮难芯勘ǖ澜玈虻暮钛区域逐步缩小到耐季唷闓冉ê蜓』蛩跣〉紻和之间约娜旧迩蚰冢詈蟠痈们蚰诘乃母龊蜓』蛑腥基因具有高度的等位基因异质性,迄今国外在不同种族来源的家系中共发现二十余种基因突变型,但对基因突变如何影响转录和蛋白翻译的研究较少。传统的疾病诊断方法都是以疾病表型改变为依据,但表型改变很多并不是特异的,出现时间也较晚,往往不能及时、及早地明确诊断,失去早期预防和治疗的机会。基因诊断可以帮助确诊现患者,估计预后;还能诊断症状前患者,给他们的生活方式提出合理建议:更重要的是检出女性携带者,为她们提供遗传咨询,指导生育,避免患儿出生,提高人口素质。目前在国内外尚未见对进行基因诊断的报道,国内对本病仅见少量临床病例报告,尚无对本病的分子遗传学研究报道。本课题在国内率先对汉族人中一个大家系年首次报道了一个大家系,以后在世界范围内陆续定了基因。郑州一一郑州大学年硕士研究生毕业论文,瘢現籧
。⋯~。建恶警堡堡冀塑燃豢塞要垦璺叁王整堡曩塑塞郑州橙。、萋哆圭要碗┢蕹撞钊!对象与方法进行了较深入的分子遗传学研究。研究对象为中国河南地区的一个累及五代家庭成员的大家系,该家系符合涣砸糯āJ苁远韵笪0ㄏ戎ふ咴谀诘蚁党稍保E懦异突变,将例无血缘关系的健康献血者设为对照,男例,女4邮苁者外周抗凝血中提取蚏,一℃保存备用。为明确中国汉族人家系是否存在种族遗传异质性,首先用聚合酶链反应和变性聚丙烯酰胺凝胶电泳微卫星亩嗵裕源硕愿眉蚁稍苯辛治觯卸⊿因与欠窳⒍约蚁抵械氖苁远韵蠼谢蛘锒稀S肞扩增产物双向直接测序方法检测患者构成基因开放性阅读框琌牡~庀宰蛹跋嗔诓嘁砬腄序列,将测序结果与公布的基因正常序列对比找出致病突变,然后在家系其他成员中证实该突变。从患者,携带者和正常对照外周血中提取总孀B己铣蒭源为模板进行,对┰霾锊捎盟虿庑蚝头潜湫訮徊蕉基因转录本进行分析。结果从结果可以看出两个受累者簟。的基因型相同,四个已知的女性携带者蟆!!ⅱ蟆"簟#。懈玫任换颍逫Ⅱ。的表型正常的男性后代Ⅳ。Ⅳ.。不携带该等位基因,表明该基因与致病基因连锁;女性携带者牧硪坏任换蛟蛴胨潜硇驼5母盖谆蚰盖椎幕因型相同,也就是说,其与野生型基因连锁。该家系中的淮锒韵野生型基因连锁,故她是正常女性;腄等位基因与野生型基因连锁,说明他是正常男性。单体型分析没有发现基因重组事件,表明与基因紧密连锁,待诊者通过连锁分析都得到了明确诊断。在颊。基因第诤蛹艚邮芴宕Ψ⑾諭槐洌个外显子的核苷酸序列未见改变。该突变在慌孕叩玫街な担她们的基因型表现为野生型与突变型杂合现象。家系中鑫词芾勰行院琍检测。Ⅳ。Ⅳ:。、Ⅳ。!,孝簟"簟"簟!!,都有与致病基因连锁的等位基因,因而她们是致病基因携带者;Ⅳ:。的两个任换蚓
无关键康个体未测到这一突变,说明——槐涫侵虏⊥槐洹T诟眉蚁祷变性聚丙烯酰胺凝胶电泳结果撼示:患者存在两种扩增片段,前者包含有全部六个外显子,后者缺失外攫子慌孕叽嬖凇述所裔西种片段,巍明她织是基因杂合子,忍时携带有野生型和突变型礴穆等氆基因,并且都被表达。上述结果证实基因鹬二内宙子剪接漫体突变鞠Ⅸ。鏊因遂遴旧菏Щτ没瘴佬荄的多恣性,通过连锁分祈使该家系中所有待诊对象酱畏㈣⊿虻诙诤凶影窘邮躿本突交虯—。谈突变姆表型共传递,是引起该家系发病的分子基础。对狢突变的检溺是繇裔待诊霹蘩穰警了准确懿藜因诊巍,并哥舞女往携繁者疆爨遗蕊咨璃,捂状畏Ⅲ篒猠突变导致基因第三多杂柰耆本模于基因翻译起始察码位于外显子娜笔Ыǖ贾率芾壅卟荒鼙嗪秩魏蛋白,其缩梁如同基因敲除,说明基因翦接点突变对其霹该家系吴性受累者基鞠正,反双是测序结暴发现了嚣种类型的:一种第二外显子与第四外烂子拼接,显示外显子笔В爨一耱秘第一羚曼予与筵翻辨显子囊接攒接,意蘸饕终显子嗣跨软失。随后对女性携带者基因的测序结果也发现外显予胪庾ぷ擗接,显示矫显予耆А6許拐摺⑴苄铖镎魅氲腟筏度分掰为,前者攥示乡杂丢失,后者为矫显子舔聍