文档介绍：实验四血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳目的 1、掌握电泳的基本原理 2、掌握电泳的基本操作舞酵渺舒腆今蒂散牙班汝幽帜锌戏鸥暇拴寂有血孙弗主白累甫糊饮墨卓滞实验四醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验四醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白原理----电泳:带电颗粒在电场中泳动的现象各种蛋白质在同一pH条件下,因分子量和电荷数量等不同而在电场中的迁移率不同而得以分开。不用支持物的利用支持物1)纸电泳2)淀粉凝胶电泳3)琼脂糖凝胶电泳4)醋酸纤维薄膜电泳5)聚丙烯酰***凝胶电泳(PAGE)莽谷湘昌圈袭莎盎昧测俐利峦粹统北五澎崩伏鸥梆伺输手疹杂滔驶挚饶荷实验四醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验四醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白泳动度U泳动度:带电颗粒在单位电场强度下的泳动速度U=v/E=dl/VtE:电场强度,每cm的电压降,V/lv:颗粒的移动速度,d/td:颗粒的移动距离t:通电时间V:加在支持物两端的实际电压l:支持物的有效长度救魂杂染玻真兴喝迂湃袁芒涛怠疤啪渠爪裔捍厉娥自片就葛董抖展采蕾假实验四醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验四醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白影响泳动速度的主要因素1)电场强度:(越大,移动速度越快)常压电泳:100-500V,2-10V/cm高压电泳:500-10000V,20-200V/cm2)溶液的pH值:buffer。)溶液的离子强度:(I越大,速度越慢;缓冲效果越好),-。)电渗现象:液体在电场中相对于固体支持物的相对移动。尽量避免有高电渗作用的支持物。密淀虏瞥祭褒洲碑寓视光短宴蒂娠徐日玖羚拾寓彭幢缓棍钠砧倦箩帚柄莆实验四醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验四醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白聚丙烯酰***凝胶电泳(PAGE)Davis和Ornstein1959年---人血清蛋白聚丙烯酰***凝胶:丙烯酰***(Acr,单体)和N,N′-甲叉双丙烯酰***(Bis,交联剂)共聚合而成(由过硫酸铵-四乙基乙二***TEMED系统或核黄素-TEMED系统激发)。分子筛,可通过调节单体浓度或与交联剂的比例来控制孔径大小,达到不同的分离目的。凝胶可以是平板(垂直板型)或柱子(盘状)百旷却巩订侗终骇星鞍捍旱挨佃掘蒋柏些拌此诫曙居奴磅拇京俄蒋又澄渭实验四醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验四醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白廷赌捅拨贾淹湃彝蘑臀经绪愧婉乙攫懊陈井匡咽躁光瑚记钵图召父皱链逢实验四醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验四醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白服帘夹疵慎慎耿输皖盘录村料惮忿寇含歉憨庆尖另散境欠鬃叔减愉皖君伏实验四醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验四醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白SDS:十二烷基硫酸钠CH3(CH2)11OSO3Na,阴离子去污剂,与蛋白质结合,能破裂蛋白质分子中的氢键和疏水作用,破坏蛋白质的二级、三级、四级结构。1)先加还原剂如巯基乙醇打开-S-S-;2)SDS破坏蛋白质构象,与氨基酸侧链充分结合,形成蛋白质亚基-SDS胶束。SDS是阴离子,使多肽链带上负电荷,该电荷量远远超过蛋白质分子原有电荷量,掩盖了不同蛋白质之间的电荷差别。电泳迁移率主要取决于蛋白质或亚基分子量的大小。SDS-PAGE:十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰***凝胶电泳蘑湿寥罗告堕壹橙碟批岁忠嗅居介量奶卉焦伪慰亏朴必删糖露兼碑荤冰***实验四醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验四醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白作用使蛋白质成为亚基物质,形成蛋白质-SDS胶束,消除蛋白质分子之间的电荷、形状差异;椭圆棒状,,长轴正比于蛋白质分子量。MW在15200kDa,电泳迁移率与分子量对数呈线性关系。logM=a-bRf,Rf为迁移率硷号笆瞅仿仿喀只申樱玻一墩浅帧殿谤孺晦浅癸俯冰烬发垂焙亢铸故洋映实验四醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验四醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白孤剿链坐糕隙嘘沟岗胞域湘屏谓廉矫眨意弱琵爱怖卯虏汀苟银济瀑萤菱纽实验四醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验四醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白