文档介绍：bined Effect of Lead and Cadmium on DMT1 Expression in Central Nervous System of Budding Rat 硕士研究生:顾成武专业:遗传学导师:霍霞教授基金项目:广东省自然科学基金(05008352)汕头大学医学院 2007年4月中国·汕头目 录中文摘要 ……………………………………………………………………………(Ⅰ) 英文摘要 ……………………………………………………………………………(Ⅲ) 英文缩写词……………………………………………………………………………(Ⅴ) 前 言……………………………………………………………………………(1) 材料和方法……………………………………………………………………………(3) 结 果……………………………………………………………………………(15) 讨 论……………………………………………………………………………(23) 结 论……………………………………………………………………………(26) 参考文献……………………………………………………………………………(27) 文献综述……………………………………………………………………………(30) 个人简历及发表论文 ………………………………………………………………(38) 致 谢……………………………………………………………………………(39) 附录1(主要实验试剂配制) ……………………………………………………(40) 附录 2(技术路线图) ………………………………………………………………(43) 汕头大学医学院硕士学位论文中文摘要背景:铅、镉是环境中两种常见的重金属污染物,中枢神经系统是其毒性作用的主要靶器官之一,发育中的神经系统对铅镉尤为敏感。儿童若长期处于铅、镉污染的环境,就可能造成金属铅、镉的双重中毒,影响智力、认知能力的发育。二价金属离子转运蛋白1 (divalent metal transporter 1,DMT1)是哺乳动物类转铁蛋白,主要参与体内非血红素铁的转运过程。DMT1不仅介导非血红素铁的吸收,也参与多种二价金属离子的跨膜转运过程,如Mg2+、Co2+、Cd2+、Zn2+、Ni2+、Cd2+和Pb2+等,并且他们之间具有竞争性作用。Fe2+对DMT1 表达的影响作用已经十分清楚,饮食缺铁可以增加脑、十二指肠和其它组织中DMT1的表达,而高铁的作用刚刚相反。这种作用是否只受铁的影响,与其转运的其它元素是否有关还未完全明了。据报道机体铁缺乏可以增加铅的毒性和负荷,在存储铁下降,尚未出现临床缺铁表现时,组织中的铅含量已经增加6 倍。铅、镉中毒患者均有贫血的表现,其原因除了铅抑制血红素合成过程的酶外,DMT1 表达的改变是否也参与这个过程?均需要进一步的探讨与研究。目的:为了进一步揭示铅、镉的神经毒性作用机制,为预防和治疗铅镉中毒提供科学依据,研究铅镉对发育期大鼠海马、小脑、皮层组织DMT1表达的诱导作用。用乙酸铅、***化镉溶液处理发育期大鼠,观察铅镉相互作用及DMT1 mRNA和蛋白的表达。方法:24 只健康的雄性一月龄SD 大鼠,随机分为对照组、单铅组、单镉组、铅镉联合组,每天分别给予超纯水(对照组)、20mg/(kg·d)乙酸铅溶液(单铅组)、2mg/(kg·d)***化镉溶液(单镉组)、20mg/(kg·d)乙酸铅和2mg/(kg·d)***化镉溶液联合(铅镉联合组)灌胃六周。灌胃完毕后,各组大鼠断头处死,取血以石墨炉原子吸收法测血铅,血镉;剥离海马、小脑、皮层组织,左半脑提取总RNA后进行DMT1 两种mRNA(+IRE与-IRE)的反转录聚合酶链反应(reverse transcriptional polymerase chain reaction,RT-PCR),反应产物进行琼脂糖凝胶电泳并扫描成像,利用凝胶自动分析成像软件Quantity One 。右半脑海马、小脑、皮层经RIPA裂解液裂解,提取总蛋白。免疫印迹 I汕头大学医学院硕士学位论文(immunoblotting)法检测DMT1蛋白表达水平。以β- actin为内对照,求出两种DMT1 mRNA和蛋白的相对值综合分析铅镉联合对DMT1表达的影响。结果:单铅组的血铅水平与单镉组的血镉水平均显著高于对照组(P﹤),单铅组的血镉水平较对照组显著升高(P﹤),单镉组的血铅水平与对照组没有显著性差异(P﹥),而铅镉联合染毒组的血铅、血镉水平较单染铅组与单染镉组显著升高(P﹤)。各组大鼠海马、小脑、皮层组织DMT1两种mRNA均有表达,与对照组相比没有统计学差异(P﹥);析因分析发现铅镉联合诱导DM