文档介绍：细胞与克隆技术论文克隆技术是众多具有极大影响力的技术之一。下面是精心推荐的细胞与克隆技术论文,希望你能有所感触! 【摘要】目的:探讨家兔骨髓基质细胞在体外传代的培养。方法取家兔股骨骨髓,分离骨髓基质细胞,于1640培养体系中培养,之后固定计数。结果在2~6×106个/cm2范围内,其接种细胞数与所形成的克隆集落(CFU-F)数呈良好线性关系。随着培养时间的延长,克隆集落也增多,变大。3周龄家兔的造血基质祖细胞较6周龄者为多。结论基质祖细胞CFU-F呈非均质性的,可能存在不同亚群。【关键词】家兔;骨髓;造血基质祖细胞;克隆骨髓基质细胞是支持和调节造血细胞定居、增殖、分化、发育和成熟的内环境主要细胞成分[1]。曾对小鼠体外单层培养造血基质细胞的培养研究,发现其接种的细胞数与成集落数呈良好的线性关系[2]。目前对家兔的骨髓器官基质细胞的研究国内研究有过报道[3]。本文用体外培养骨髓基质细胞技术[4]对家兔的骨髓基质细胞体外培养特点进行了探讨。 1资料与方法 ***、3~6周龄之纯种家兔。 ,小牛血清(中国药品生物制品检定所),平底中性玻璃培养瓶,二氧化碳孵箱,微孔滤网。 ***麻醉处死;3周龄者则用颈椎脱臼致死。在无菌条件下取双侧股骨修洁后剪掉骺端,用带16号针头注射器以1640培养液冲出骨髓细胞,再用滤网过滤制取单个核细胞悬液,计数后用所需细胞量进行体外CFU-F培养。 -F培养和测定将6周龄家兔的骨髓细胞以2×106个/cm2,3周龄的以2~6×106个/cm2置于含20%小牛血清的1640培养液的培养体系的培养瓶中,于37℃,5%CO2,饱和湿度的CO2培养箱内培养。分别于第4天,第6天用含20%小牛血清的1640培养液换液,培养到第八天冲洗后用甲醛固定半小时,蒸馏水冲洗后用姬姆萨染色12min后晾干,待计数用。 2结果 -F克隆集落形成过程观察于培养第4天在倒置显微镜下观察培养细胞,发现淡红色背景下(红细胞)有圆形发亮的较大基质细胞生长,拉长的细胞较少见,振荡后观察未见发亮细胞浮起,说明细胞已贴壁。培养第六天镜下观察,发现基质细胞明显增多,拉长者较多,形成了克隆集落,6周龄的骨髓基质细胞生长速度明显低于3周龄者,且培养同天数的6周龄的克隆集落数明显低于3周龄的克隆集落数。 -F计数计数由50个以上细胞所形成的集落数,结果如图