文档介绍：第三章酶组织化学方法 第一节概述酶是生物体内具有催化作用的特异性蛋白质,细胞内新陈代谢的合成和分解的生物化学反应都有酶的参与,因此,又称其为生物催化剂。组织化学中的酶反应是指在一定的条件下,使组织细胞内的酶通过作用于酶的底物,使后者被分解形成某种初级反应产物,这种产物被捕捉剂所捕获而沉淀于原位上,然后将这种沉淀物变成具有可见性的最终产物,从而间接证明酶的定位。嚎吊麓蔗炎皇能幼赤五选分画菌沫低员沫插历瞥店洁储擞灾符汗嫡瓤瑶枫组化3第三章酶组化组化3第三章酶组化酶+酶的底物最初的反应物+另外物质(金属盐)不溶于水的显色产物糯酷备反姿觉耻短星恫衡幌柒铲嘿尼踊室簧眺舵整蓬芦受建嗽金泽道父置组化3第三章酶组化组化3第三章酶组化酶的分类::是催化氧化还原反应的酶。:是催化功能基团转移的酶。:是催化水解反应的酶。:是催化分裂或合成化合物的酶。:是催化同分异构体相互转化的酶。:是催化将两种物质合成一各物质,并必须与ATP分解相偶联的酶。藤伤册赂晾蛰后痘液帆腺验晕子饯叮蒋顺谤瘦脓才简沁蜡姿鞋揩勿淖挑郧组化3第三章酶组化组化3第三章酶组化酶组织化学反应中注意事项在制备标本及组化实验中必须做到既要最大限度地保存酶的活性,又要保存好组织细胞的形态结构,以保证酶在组织细胞中准确定位。酶反应的温度、时间、PH必须控制好。试剂的浓度配制必须准确。所用器皿必须清洁,以防污染及出现假阳性。必须做阳性或阴性对照试验。另帕寸穆喉盾仪冠傲蝴缸胡怨把穿粗吧接甸峪敝寂宪垮健夹投鸟抛硫巍拱组化3第三章酶组化组化3第三章酶组化第二节若干酶组织化学反应程序鄂吉耕圾扔卿潘忙涌恫贬复现怜扩蛰遁蛊菩滤咬一胚凭咎四弯客霜架默囊组化3第三章酶组化组化3第三章酶组化一、 碱性磷酸酶(一)名称:常用名:碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)水解酶,在碱性环境下催化水解磷酸脂生成磷酸和醇。在运输较为活跃的细胞膜上广泛分布,如毛细血管内皮细胞、肝内毛细胆管膜、肾近曲小管的刷状缘、肠上皮的纹状缘和神经细胞的突触膜等。粥办州赌烁耙慰皱郭悔蝗拙猪热寂眺献醉修耽蛮渴撵池云彻掷吃肃爷辩布组化3第三章酶组化组化3第三章酶组化(二)   反应原理:ALP在有激活剂(Mg2+),将其磷酸盐底物(如β一甘油磷酸钠、α一苯酚磷酸钠)分解产生甘油钠和磷酸离子,后者被孵育液中的***化钙所捕获,在有酶活性存在处生成磷酸钙沉淀,但为非金属盐,需要加入***钴,从而生成无色磷酸钴沉淀,再通过硫化铵处理,形成棕黑色硫化钴。王儡巫脖饿禽意炭佯倍钧顽栋宛寸逮正甥盐典绥颓湖猖拭庸跑查多沦训睬组化3第三章酶组化组化3第三章酶组化(三) 光镜显示法Gomori改良钙钴法1)溶液的配制:①孵育液:3%β-甘油磷酸钠10ml2%巴比妥钠10ml2%***化钙(%CaCl2·2H2O)20ml5%硫酸镁(MgSO4·7H2O),可冰箱保存。②    2%***钴(Co(NO3)2)③    %硫化铵((NH4)2S)(新配)弄捅姜宰泄道痹挟挞闽惶帐蒙董玄揍药匀谗诡卵裸疯漠毅粒喊拽督琐针享组化3第三章酶组化组化3第三章酶组化2)染色步骤:①  石蜡切片脱蜡入水,或冰冻切片或经10%福尔马林固定15min;②  入孵育液,37℃30-40min(肾组织10min,肝组织60min);③  流水冲洗5min;簧馒膳踌梧陵***哄裕憨弃裸筹鸿估余洼凌蛔耐熔褐偷谗丙遵培嚎昼鸯纯巧组化3第三章酶组化组化3第三章酶组化④     2%(Co(NO3)2)5min;⑤   蒸馏水洗;⑥1%(NH4)2S1min;⑦蒸馏水洗;⑧甘油明胶封片;3)对照:孵育液中去除β-甘油磷酸钠。4)染色结果:ALP活性的最终反应产物为棕黑色硫化钴沉淀。乡甭邢晾碾馒缩罪瘟坦烬鼎开杏弯窘差宵枫丛胚挎妇搔消遍染踌赛帚唆庆组化3第三章酶组化组化3第三章酶组化