文档介绍：大连理工大学
硕士学位论文
不同培养方式长期扩增神经干细胞的比较
姓名:郑可
申请学位级别:硕士
专业:化学工程
指导教师:刘天庆
20050619
要摘神经干细胞的体外培养方式有神经球悬浮培养和单层贴壁培养两种。为寻求适合体的比较。首先从∈笈咛デ澳宰橹谢竦昧讼赴瑼消化和机械吹打后培养方式培养的细胞均为神经干细胞。进而分别取体外培养时间为天、天以及天的悬浮和单层培养的细胞,通过荧光染色、免疫荧光以及流式细胞术等检测方法对其经干细胞都能在长期的体外培养过程中保持良好的生长状态,但其增殖能力存在差异:力则无显著的差别。在长期的体外培养过程中悬浮方式培养的细胞中阳性细胞所占的比例要高于单层贴壁方式,而单层贴壁培养的细胞中粜韵赴谋壤蛞高于悬浮培养方式的细胞。此外,本文还确定了悬浮培养的神经球在直径苯传代为传代的合适时机。进一步阐明了悬浮和单层培养方式所培养的神经干细胞在增殖式要优于单层贴壁培养方式。关键词:神经干细胞;悬浮培养;单层培养外大规模扩增的培养方式,本研究对悬浮和单层贴壁方式培养的神经干细胞进行了系统形成单细胞悬液,分别以悬浮和单层的方式进行培养。、增殖能力及异质性进行了比较。结果显示,通过两种不同培养方式获得的神在体外培养的天和天,单层贴壁方式培养的神经干细胞的增殖能力要强于悬浮方式培养的神经干细胞,而在体外培养的炝街峙嘌绞脚嘌纳窬上赴脑鲋衬能力及异质性等方面都存在着差异。对于体外大规模扩增神经干细胞而言,悬浮培养方人连理工大学硕士学位论文
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作者签名:咎习期:必∥独创性说明作卷郑重声明:本硕士学位论文是我个人在导师指导械难芯抗ぷ及取樽磅究成果。尽我所知,除了文中特舅翻凌葑⒑椭滦磺椒讲ⅲ畚中不包禽其他人已经发表裁撰写的研究戏果,也刁菸;窳舸罅砉ぬ或者其他照橙的学位或涯书所後蠲过的攒料。与我一同工俸的同志对本磺究所做的贡献均已在论文中做了喇确的说明并表示了谢意。
畜号震予遴行生鹈学研究和移撩治疗螓霉￡动物孛枢婢电碧仔呷ず跸胂箜案丛泳恐宦蹲褐篥毁缛倚藁汕屏Α这些特性使得治疗神经系统的退行性疾瘸和神经系统的损伤变得尤为困难。随着憋个社会老龄入口的逐渐增多,遮一挑战日益增大。例如,在美国每年用于治疗老年痴呆类疾病戆费趸羲达刭诩栽!O庖皇置磕昊乖诓慌训莨唷U饫嗉不疚蘼坜凭錾还是在情感上都给患者的家庭带来沉重的负担【俊幸运的慰,胚胎和成体中枢系统中舆有自我修复能力的干细胞的发现为损伤和退行惶疾瘸瓣治疗带来了一线藜望圜。瞧是中柩米合低炒皗牵经于缨艇资源卡分毒疆,孬且获取于细胞的技术十分复杂,难以从病人脑中或脊髓中取姐足量的神经于细胞使之分化成所需的神经元和胶质绷胞用以移植治疗。阏此,必须设法利用少量的神经干细胞来源进行俸步笕锬r裱箋孛经予缀蘧褥嚣大豢罐殖,霜霹缣籍荚予细燕采分耗之特幔从而为中枢神经系统疾病的治疗提供细胞来源。成体干细胞可以从自体或同种异体取得。自体干细胞体外扩增并最终进行移植治疗哥瞵馥笼遂镣俭理溺题。鼷楚囊髂享率经予缡蕤熬取耱卺§位秘方法在技术上存在着溺题,异体神经干细胞在短期内可自&更具可操作性。并且神经细胞对于异体移植的免疫反应较其他种类的细胞要小得多。神经干细胞的体外扩增可以提供相对大量和稳定的细胞来源神经干细胞的体外培养方式主要有嚣张:一惺且孕〉姆绞角颗嘌髅笾谐汕蚺养,另一种是在经过处理的培养器皿的表面以单层贴壁的方式培养。等大部分学者主要采强悬浮豹方式珞养神经于缨稳辨2筒捎梦褐址椒ㄕ樵醹串经干绷麓霹,随着昃虺叽绲脑龀ぃ嘌诘挠Q镏噬胫鸾ゼ跎伲崾箋申经球内形成暗黑的核心,内部较易出现调亡、坏死以及吞噬细胞】,甚至可能出现神经球中空的情况。等人警采用单整貉壁静方式臻莽箨经干细黥\泖ㄅ嘌南肝扔敫⒀艚哟コ浞郑不存在营养物质的交换困瓣问题。丽且以单层的方式培蓁更蠢利于形态学的观察秘免疫技术的操作【尽5诘ゲ闾谂嘌讨锌赡艹鱿指上赴只南窒骩P『偷层这两琴孛培养方式备其优势,穗将同时采用这稻稀培养方式培养的神经于细胞进行系统大连理工大学硕士学位论文
的比较还未见报道。因此有必要对悬浮和单层贴壁这两种培养方式进行综合的比较,对比其培养的细胞在活性和增殖能力及细胞异质性等方面的不同,以期得至屎仙窬上庭薅努大鬟凑扩臻豹蘩养方式。这对予麓决中枢享枣缝系统缨戆移穰治疗遘疆中豹绥疯来源问题有若熏要的意义。不同培养方式长期扩增神经干细胞的比较
南鬃凼神经千细胞在体内可能的位点麓藿缨辫发育分纯骚究静深入,予绥耱熬磷究与疲塌毫逐渐成为瑟豹分支学辩。当前对中枢神经系统干细胞的研究已曦为发育神缀生物学的重要部分,也是继造血干细胞之后,研究比较全面的另一重要的系统干细胞。胚胎与成年哺乳动物脑