文档介绍：ClassifiedIndex::ICTRANSFORMATIONOFDENDROBIUMCANDIDUMWallEXLINDLWITH删CGENEGrade:2010Candidate:ShiCaijuanAcademicDegreeAppliedfor:MasterofScienceSpeciality:BiochemistryandMolecularBiologySupervisor:WangWanjunMay,2013西南交通大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权西南交通大学可以将本论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复印手段保存和汇编本学位论文。,在年解密后适用本授权书;。(请在以上方框内打‘‘√’’)学位论文作者签名指导老师签名:锯手日期:名仞弓。5--.’.多日期物/歹./-西南交通大学硕士学位论文创新性声明本人郑重声明:所呈交的学位论文,是在导师指导下独立进行研究工作所得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体,均已在文中作了明确的说明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。本学位论文的主要创新点如下:(1)结合了根瘤农杆菌介导法与超声波法两种技术,建立SAAT法介导铁皮石斛遗传转化体系。(2)农杆菌介导的铁皮石斛遗传转化研究中,外植体多为类原球茎,本研究则采用原球茎为转化受体,报道较少。(3)对铁皮石斛再生苗壮苗培养条件进行优化,寻找为入土移栽提供整齐、高大、健壮以及根系发达的试管苗的培养条件。学位论文作者签名:脯鹕日期:,哆西南交通大学硕士学位论文主要工作(贡献)声明本人在学位论文中所做的主要工作或贡献如下:(1)查阅国内外相关文献,在导师指导下制定实验方案和实施方案,并进行预实验,初步确定实验方案可行性,并进行修改。(2)以由铁皮石斛种子发育成的原球茎为转化受体,优化了超声波辅助农杆菌介导铁皮石斛遗传转化条件,探讨超声时间、侵染时间、共培养时间等因素对转化的影响,初步建立转化体系。(3)构建NAC基因的表达载体,并采用冻融法将其成功转化到农杆菌感受态中。(年)在卡那霉素筛选压的作用下对转化的植株进行筛选,并诱导抗性愈伤。(弱对铁皮石斛再生苗的壮苗培养条件进行了优化。本人郑重声明:所呈交的学位论文,是在导师指导下独立进行研究工作所得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体,均已在文中作了明确说明。本人完全了解违反上述声明所引起的一切法律责任将由本人承担。学位论文作者签名:确嘲日期:佣弓、(.)是一种重要的兰科资源植物,具有很高的药用价值,又是一种名贵的花卉植物,由于野生铁皮石斛繁殖周期长,存活率低等,近几年来,有关兰科植物的组织培养和一些重要基因的遗传转化的研究报道越来越多。本实验采用超声波辅助农杆菌介导法(SAAT法)转化铁皮石斛原球茎,探讨铁皮石斛遗传转化的影响因素,初步建立一个高效的转化体系。另外,对于铁皮石斛再生苗的壮苗培养条件进行优化,探讨最适再生苗生长的培养基,主要研究结果如下:(1)将预培养2d直径约lmm的铁皮石斛原球茎接种到筛选培养基中,确定卡那霉素筛选转化与未转化的原球茎的有效选择压。结果发现:200mg/L卡那霉素能有效抑制原球茎的增殖与分化,并出现死亡现象。最后将200mg/L作为有效选择压浓度。(2)由铁皮石斛种子发育成的原球茎为转化受体,优化了超声波辅助农杆菌介导铁皮石斛遗传转化条件,探讨超声时间、侵染时间、共培养时间等因素对转化的影响,得到最佳组合条件,初步建立转化体系。结果发现:使用90W、40KHZ、初始温度为20℃的超声波清洗器对原球茎超声处理3rain、~,侵染15rain,然后将其接种到共培养基中暗培养3d。在体式显微镜下观察GUS瞬时表达情况,发现其表达效率高,,原球茎的损伤程度较小。(3)根据实验室己提取的外源基因,AC2基因表达载体,以卡那霉素抗性基因为标记基因。并采用冻融法成功转化到农杆菌感受态中。经验证转化成功。(4)在Kan霉素筛选压的作用下对转化的原球茎进行筛选,并诱导抗性愈伤的形成。共转化原球茎基数为900块,目前已得到抗