文档介绍：天津科技大学学位论文原创性声明本人郑重声明:所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究工作所取得的成果。除文中特别加以标注引用的内容外,本论文不包括任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果内容,也不包括为获得天津科技人学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。对本文研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名:青脏侈同期:弘l≯年弓月J7同知识产权和专利权保护声明本人郑重声明:所呈交的论文是本人在导师具体指导下并得到相关研究经费支持下完成的,其数据和研究成果归属于导师和作者本人,知识产权单位属天津科技大学;所涉及的创造性发明的专利权及使用权完全归天津科技人学所有。本人保证毕业后,以本论文数据和资料发表论文或使用论文工作成果时署名第一单位仍然为天津科技大学。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名:寺雁侮日期:2纠辉1月I7R学位论文版权使用授权书本学位沦文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留并向幽家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,同意公布论文的全部或部分内容,允许论文被查阅和借阅。本人授权天津科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密ll(请在方框内打“巾),在年解密后适用本授权书。奉学位论文属于4i保密f叫(请在方框内打“、/”)。作者签名:寸雁似日期:∞1了年3月l7同导帅鹳:积、l√嗍:年月同摘要酱油质量是酱油行业发展的关键,而酱油品质主要取决于酱油风味。酱油风味的好坏与酱油发酵的酵母菌种密切相关。但是,在高盐稀态发酵后期的盐水发酵中含有17%的食盐,这种特殊的环境对微,土物的生长繁殖很不利,导致细胞的存活率降低,这就要求生产中使用的酵母具有适应恶劣环境的能力。因此本实验室利用基因组重排方法对S酵母()进行基因重排,。目前对s酵母耐盐机制的研究尚未完全,因此本文从分子转录水平、基因序列及蛋白质结构进行比对分析及基因过量表达等方面着手,对S和S3—2的耐盐基因GJPDj进行研究,为阐明S酵母的耐盐机制奠定基础。本文首先构建测序质粒pUCl9-,对s和s3—2的GPDJ克隆测序。结果发现,相比于S菌株,(ATG起始密码子之前第66bp位置缺失一个碱基A;ORF巾第665bp位置上的G突变成A;终止密码子TAA下游第73bp位置上增加了一个G碱基)。而后将测序结果翻译成氨基酸,预测蛋白质的二级、三级结构。分析发现,s和s3—2之问有1个氨基酸发生突变即第223位精氨酸变成赖氨酸(Ar9223Lys)。继而从分子转录水平丌始研究,通过半定量PCR(RT-PCR)对不同盐浓度下S和S3—2酵母GPDlRNA表达量进行分析。结果表明,S3—2GPDl表达量明显高于SGPDI。最后,构建工程菌株WYS3—2和WYS及对照菌株WY,即将构建的质粒YEpl95一S、—1A中,并进行一系列指标测定,研究发现,菌株WYS3—2的耐盐性强于WYs,同时又都明显强于对照菌株WY。通过本文的研究表明:S3—2GPDl基因序列中ORF的碱基变化并未导致GpdlP空间结构的改变,;』基因转录水平提高的重要原因,进而使菌株耐渗性增强;Gpdlp是诱导甘油产生的重要酶,能够提高纲胞对外界环境的应答能力。关键词:GPDl;S酵母;;耐盐性AbstractThequalityofsoysauce,akeytotheindustry,dependsontheflavorofsoysaucewhichiScloselyrelatedtothe},—saltliquidfermentationofsoysauce,Zrouxii,%,themetabolicactivityoftheyeastislow,whereyeastsneedtohavetheabilityoftheadjustmenttothepoor