文档介绍：中国协和医科大学
博士学位论文
人BRI<,3>编码蛋白N端与SCG10的相互作用影响细胞微管结构
姓名:池志凯
申请学位级别:博士
专业:生物化学与分子生物学
指导教师:强伯勤;袁建刚

中文摘要蚴粲贐基因家族的一员,目前得到分离鉴定的该家族成员包括。属于型单跨膜蛋白,有一个跨膜区,私隙蹋琧端较长。生物信息学分析没有发现任何的亚细胞定位信号和功能结构域。本实验室前期工作已经完成了谋泶锲追治龊捅泶锊锏难窍赴位分析。更为重要的是在前期工作中,以Ⅺ鞍椎腘端作为诱饵蛋白,利用酵母双杂交系统筛选人胎脑文库,发现鞍子隑鞍的朔⑸,激光共聚焦显微镜的观察发现这两种蛋白在神经系统来源的细胞中呈现共定位。在上述工作的基础上,我们深入研究了与嗷プ饔玫纳物学效应。鞍鬃魑猻鞍准易宓囊桓龀稍保哂幸种莆管组装,促进微管去组装的功能。因此我们首先研究了蛋白和蛋白对细胞微管结构的影响。体外实验结果表明,蛋白对白引起的抑制微管组装的过程没有明显影响;而对于其促进微管去组装、导致微管解聚的过程具有明显的抑制作用。体内实验研究结果表明,蛋白在细胞中的过表达能够显著的抑制由鞍坠泶镌斐的细胞微管网络的解体。因此,我们认为蛋白是一种在神经元细胞中具有微管稳定作用的蛋白,其通过与蚱渌鞍椎南嗷プ饔茫来调节神经元细胞的微管骨架结构。此外,作为一个跨膜分子,
端参与调节细胞微管结构,为研究其是否在细胞内信号传导过程中发挥作用,我们还以编码蛋白质的俗魑S斩鞍祝媒湍杆咏系统筛选了人胎脑文库,试图寻找与之相互作用的蛋白,此部分工作目前尚在进行中。
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前言阬橇街和阿尔茨海默病相类似的家族性痴呆症罱姆肿由镅а芯糠⑾这两种疾病都是由夯虻耐槐湓斐傻摹虮嗦氲鞍资钦闲膜蛋白鞍准易宓囊桓龀稍保玫鞍准易逯辽侔个成员,即,和。分子生物信息学分析表明该家族蛋白的瞬糠衷谙赴内,无明显的信号肽序列和任何已知的功能结构域。;蛑饕T诔骨和软骨形成组织和皮肤表达。基因在人和小鼠中广泛表达于各个组织‘。文献峁允荆珺蛑饕T谀员泶铮乇鹗窃诖脑皮层、延脑、杏仁核、海马、丘脑、尾状核和脊髓高表达【俊D壳埃有还任何有关易宓鞍籽窍赴ㄎ缓蜕镅Чδ芊矫娴难芯勘ǖ馈全长,编码霭被幔砺奂扑惴肿恿课,鹊绲阄.。坏奶於彼崾且桓隹赡艿腘腔点,和位丝氨酸是两个可能的磷酸化位点。跨膜区预测表明在—位有一个单跨膜结构域,这一结构域在该家族的所有成员中都是保守存在的。人和鼠/〉墓叵怠N沂乙丫
编码蛋笽编码蛋白在微管蛋白组装和去组装过程中的功能。此用的方法获得了人基谋嗦胄蛄泻托∈驜娜ǔ蛄小杂交和鼠组织切片和整体胚胎的原位杂交研究结果结果相吻合,显示蛑饕T谥惺嗌窬低程匾煨员达。昵┘,呈斑块状分布,类似于高尔基体在细胞内的定位部位。利用酵母双杂交体系以编码蛋白质的俗魑S斩鞍祝秆∪颂ツ詐文库,发现了微管去稳定蛋白胫嗷プ饔茫⑶以谔逋夂吞迥谙低持醒证了诱饵蛋白与捕获蛋白之间的相互作用。我们在以上结果的基础上,利用体内和体外两种体系,进一步研究了外,作为一个跨膜分子,擞胂赴⒐芡缦喙兀涫欠癫斡胂赴内信号传导,为此我们以编码蛋白质的俗魑S斩鞍祝酝佳罢与之相互作用的蛋白。
聚合酶,咖酆厦浮连接酶、分子量标准购自上实验材料饕;约异丙基硫代半乳糖苷、猤购自尽10贰’,谎羌谆ū0贰⒐蛩岚贰⑹榛撬崮、溴化乙锭、鲑精任猄公司产品。三羟甲基氨基甲烷、琼脂糖等购自公司。染料为产品。其它各种试剂均为进口或国产分析纯试剂。鹤訟鹤訯<钚粤姿崦概剂Q蚩雇肐、羊抗小鼠标记羊抗小鼠⒖タ寺】固寰鹤灾猩缴锕こ坦尽ぞ呙浮⒎肿恿勘曜技笆约梁海公司及大连公司;各种限制性内切酶购自美国公司或协和友谊开发公司;蛋白分子量标准..狿公司产品;蛋白预染分子量标准购自美国荆籇凝胶回收纯化试剂盒购自北京博大生物公司。酵母双杂交系统试剂盒鹤訡柿T靥—河糜赑产物的克隆;
、台式低温离心机公司⒗涠掣咚倮胄幕、—:用于真核基因的表达和定位;其中,—喊譖公司;,琾—,.购自公司;其它质粒由本实验室保存。文库融合的人胎脑目夤鹤悦拦公司。目馐且源蟪Ω司鶥;拥男问教峁┑摹妇⒔湍讣跋赴嘌培养基琘购自公司。酵母培养用鹤訢公司;酵母双杂交用各种氨基酸、,.、、、⒎畔呔5任猄公司产品。嘌虳高糖培养基为静罚惶ヅQG逦狧公司产品;胰蛋白实验所用菌株校蟪Ω司暧杀臼笛槭姨峁湍妇闥购自锖妥橹牧家猪脑组织:购自