文档介绍：郑州大学
硕士学位论文
人微小病毒B19-VP2基因真核表达质粒的构建
姓名:彭新
申请学位级别:硕士
专业:免疫学
指导教师:赵国强;武峰
20030501
人微小病毒蛘婧吮泶镏柿5墓菇摘要研究目的:人微小病毒类疾病的一种病原体,可引起传染性红斑、再障危象等多种人类疾病。目前尚未的问题。≡癯龅腂一乖砦环岣磺基因片段重组其中,,并将重组质粒免疫动物,观察其免疫效应,以探讨人微小病毒籚基因作为基因疫苗的可行性,为最终建立针对该病毒的特异性实用疫苗奠定基础。方法:从人微小病毒幕蛐蛄泻徒峁狗治鲋锌苫竦肂一陌被嵝蛄校利用和软件对谋砦唤蟹治觯辉诖嘶∩仙杓瞥籚靶区域引物,为了克隆方便和插入方向正确,特意在两条引物上分别加行筛选,并进行庑颍员Vた寺〉哪康钠蔚恼沸裕唤刈橹柿盖校缬敬炕蠼醒强寺。∽⒓彝茫裳#珽方法测特异性抗体。硕士学位申请人彭新推荐导师赵国强武峰郑州大学基础医学院微生物与免疫学教研室V系微小病毒属中唯一能致人建立针对该病毒的特异性疫苗,对人微小病毒腥镜脑し篮椭瘟剖羌贝饩入虰内切酶位点;利用际醮雍珺病毒蛄械闹柿V扩增出颍唤淞釉趐猅质粒上,转化擞胮猅质粒的/蛄猩杓瞥鲆锒粤拥恼沸越屑ǎ肁抗性对阳性克隆进—,再次筛选和鉴定出阳性克隆,并进行庑颉4罅颗嘌⑻崛⒋
它们分别是①②③④尬环旨哄藻芏訴鹣话鞭妓嵬ゅ龇纸危瓴饺范个寝位。軬⑥⑦汛疆萤谢蚶┰觯阂允秤蠦病毒全基因的质粒为模板,利用┰龅玫絍基因中的靶基因,熬黾罨浴÷“镓豢寺●笞鹤咏峒兰ǎ和驶肴沲浮瓢e医泳鯰疭俸为引物对转化后的质粒进行筛选扩增,得到难粜钥怂恚な礏一谢因成功插入—吹玫絧猅—蛔橹什凇=刈橹柿猅和。昊埙逪養薅甥蓐遴雩亍亚竞爨,淡零刭「旯璴凌对转化爝的质粒进行扩增,得到难粜钥寺。赫暄橇粱恐刈河璨獯┲绽酰何壳┒ㄈ斓奖N÷◆钭ぞ孤△叻熳—,证实我们所克隆/艘克隆出的基因片段的碱基组成与公开发表的蛄型耆恢拢闯晒菇╬甀冀孩表达载钵。瓻结果:实验动物的体内产生了高效价的抗《镜腎抗体。绐论:本课题利用分予生物学软件分析出乖环岣磺范个莰原表经,主要集中予霞氨基羧廖到孛。剥震分子生携学的方法,⑼ü庖呓又郑诙物体内产嫩了较强的免疫威答。通过此项研究,为人微小瘸毒蛞呔难制奠定了凝实豹鏊破,势必遴一步磺究基予媳砦簧镅О锵灰咻鎏峁┝关键词:入微小病毒篤;基因疫苗;真核表达结粜:详实的数据。
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秘悉》§翱俸产艇傈护住免疫疲答““。人微小病毒甐基因真核表达质粒的构建基因疫蘅的研究现状基因疫苗兔痰是年代初刚剐兴起的新方法,受到国内外的久徽小病毒褐氯成袄蒴涎宰淳没眨琹、瘸毒器蹩已稚壤一镬久炎致把硕士学位串谴人赵国强武峰郑翊大学基础医学院徽艇物与毙疫学教研室V广泛重视,成必当蘸分予生物学研究的黧点和热点之一。咭窕蚝怂嵋呙纾街附ū嗦肽场囟ǖ鞍字士乖幕蚱卫堪出寒,著与一载傣楗连接瑟撬建戆囊核表达羧钵。它将褒望成必继穗原俸疫薅、亚擎位疫苗之后的第三代疫苗。将基因疫苗直接接种机体后,即可在被接种者体内表达出该抗原胥白,基因疫苗与传统的鬣白质疫苗相比,理论上主要有以下几个优点。。“:基因疫苗产生的抗原更接近自然感染状态,产生的抗体主要针对抗原决定簇的构象。重组蛋自质疫苗产生的抗体则主要针对连续性抗原表僚。基因疫苗是杀伤性赴最有效的诱导剂,能够激发机体产生强烈而持久的细胞免疫,而机体抗病毒童要依靠细胞免疫。重组的蛋白质疫苗则主癸产生体液免疫。基因疫蓥可越同一个矮粒到冬针对多秘疾病躲基因疫蕊,相当予多价疫苗;重组的蛋白质疫苗通常为单价疫苗。病的细小病毒,易侵犯代谢较活跃的缀织细胞皴器官,瓤骨髓、红细臌、肝膊、心肌,感染后宿主细胞内可出现病毒包涵体。氖群煜赴匦允且蚱淠芙岷螾血烈抗原碆的细胞受体为红系鲴黢貘上酌糖营蘸拢簆抗藤不仅弱限予红维臆膜上,奁匡孩缨藏、心瓢细躯也可发现,因褥导致贫斑、血小板减少、心肌炎的发生“””U攵愿貌《镜闹囟械鞍字室呙入微小瘸霉钔⒈缛龋罹何O咭柿碊分子,缝。基因组右侧编码两个结构蛋白軩艺叻直鹫颊鲆驴堑鞍椎%和%,彭赫推荐导师基因疫苗又称为正处于实验阶段“⋯。
材料。胀ㄊ圆茫杭贼怼⒙劝鳌⒁煜尽②の燹肌⑽奕掖肌⒓鹨宜嵴蒌⒍久顾亍研究的目的、;訲疭基除了在狈蹦┒擞个氨基酸的独特区外,其他结构糯同。其中蚔均辗产生凌漉疫静撬薅,怒缪1;ど貌亍9涫