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文档介绍

文档介绍:中国协和医科大学
博士学位论文
人新分化抗原5D4与5C5的表达、功能和结构
姓名:汪燚
申请学位级别:博士
专业:免疫学
指导教师:朱立平

摘要是本实验室克隆到的编码的两个新的人分化抗原。本论文工作的目的是研究它们的表达、功能及可能的结构。为了研究它们的功能,首先参与前一博士研究生史耕先构建的腺相关病毒载体挠τ醚芯俊N叶基因转导的研究协助证明了用此载体包装的病毒可介导基因导入病毒转化的人赴5嫉幕蚰艹て诒泶铩本论文的工作首先构建了重组腺相关病毒载体反义皃一正义正义拱傲丝赵靥宓牟《究帕!0颜庑┎《究帕7直鹱5既肴薆细胞并对细胞作了克隆。为了检测蛟谡庑┫赴械谋泶铮聘髁丝分子的单抗。为了制备单抗,构建了的重组原核表达载体—诖蟪免疫小鼠,用椭泻褪笛樯秆。玫搅耸鲈咏涣鱿赴辍S捎谧畛跎秆∪细胞作靶细胞筛选得到的,故本论文工作也用赴靼邢赴I鲜鲈咏涣鱿赴分泌的单抗对固定的赴恃粜悦庖哂ü馊旧ǎ没细胞作靶细胞行免疫荧光染色,流式细胞仪分析仅少数单抗呈阳性。本论文的研究中采用其中一个克隆产生的单抗。化抗原。用单抗魈秸耄砸吧、转导空载体⒆5嘉薰谼片段这表明已经建立了只乖泶镆种频细胞株以及相应的对照细胞抹·用单抗魈秸耄曰钕赴髅庖哂ü馊旧ǎ鸄赴难粜月始坝ü馇慷让飨越档蛅一段正义危宰龆哉,包装成病毒颗粒匆及一杆菌泶锍隽朔肿恿课的诤系鞍祝璆亲合层析拄纯化后扁桃体细胞文库所用的タ故怯没细胞免疫小鼠,并用活用此单抗虺频タ魈秸耄细胞胞膜中免疫沉淀出囊惶单一的蛋白带,它符合嗦氲牡鞍椎拇笮 U獗砻是表达于细胞膜的一个分及转导反义细胞的蛋白质行〖<觳狻ぜ鸄隆细胞的信号减弱,尽管减弱的程度不同,而隨的克隆细胞的信号均未见变化·活细胞免疫荧光染色再次表明泶镉诎ぁ中国协和医科大学博:貉宦畚
%,:禾眯┧坷蛭挥谌嘶蜃榈号染色体长臂的带,含有鐾庀宰樱ǔの,其—编码霭被岬脑亩量蚣埽砑げ—。其胞内区为械鞍准っ窩磷酸化位点觥⒗%,赴,赴%。.。在人组织细胞瘤细胞株功能研究发现,在正常培养的情况下,当细胞浓度超过达抑制的赴飨越掀渌赴た臁表达正常的对照细胞在达到×个/后则开始大量死亡。另外,泶镆种频细胞克隆在生长到高密度时不再成团,呈分散状态,而对照细胞仍然成团生长。泶镆种频细胞表面粘附期的细胞比例为对照细胞的丁4送猓表达抑制的赴晕扪G宓哪褪芤较对照细胞明显增强。这种细胞端粒长度明显减短。基酸。软件预测—R桓隹缒で赡苁粲贗型膜蛋白。鞍椎腘端有一个亮氨酸拉链结构域。本论文的工作用印迹检测了小及在多种组织中表达,见在所有检测组织中均只有一个转录本,长约基因比较普遍表达于人体各种组织,但表达量有着明显差别。脾脏、前列腺、睾丸、白激酶磷酸化位点觥⑷舛箍荃;坏个以及在的丝氨酸丰富区域。上述结果提示,的膜蛋白。但用作探针印迹检测见、、、⒃%。只乖谌薆细胞株的表达为:.,.,甌%琋%∠赴闗赴け泶锼轿%。这表明只乖饕1泶镉贐细胞。觯痬保因子谋泶锼浇隙哉障赴昝飨越档汀表达抑制的赴τ贕全长为,从至R桓隹7旁亩量蚣埽嗦个氨转录本的大小肠、结肠表达最强,卵巢、外周血白细胞其次,而在胸腺几乎不表达·%
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