文档介绍：中国协和医科大学
硕士学位论文
人类白细胞抗原-DRB1位点实时荣光聚合反应测定方法的研究
姓名:李军燕
申请学位级别:硕士
专业:临床检验与诊断
指导教师:李金明
人自细胞抗原一位点实时荧光聚合酶链反应测定方法的研究中文摘要型方法一实时荧光聚合酶链反应舛ǚ椒ǎ迪至俅财鞴目的研究建立一种新型人白细胞抗原瓺蚍移植狣焖僮既返姆中汀7椒ū疚氖紫炔捎狣位点序列特异引物,利用可与双链岷系挠光染料欣┰觯醪矫鹘⒘薙觳釮椒ǎ⒍苑从μ跫缤嘶鹞露取度等进行了优化。由于胨碊的结合是非特异的,所以要控制反应条件以提高反应的特异性,而且,检测结果的判定要依靠扩增产物的熔解曲线的分析。采集份未知型别的俅脖瓯荆蠸觳釪位点,并经测序验证结果。以此为基础,又对坏愕腜条件同时进行了优化,并运用双盲原则用优化后的椒ê蚉/椒ǚ直鸺觳萘俅惭荆⒈冉狭秸呓中国协和医科大学硕士学位论文
果一致性。结果本文结果显示,退火温度对反应的特异性影响很确,可成为一种临床瓺蚍中偷男路椒ā大。一般位点引物的退火温度理论值约为。臼笛橥火温度增高到℃可保证扩增效率和特异性。浓度过高也会降低反应特异性,根据本文实验结果确定为份临床样本坏慵觳饨峁劢馇叻治觯份标本为粜裕┰霾镉美胄闹炕螅蠨直接测序结果证实与测序结果一致。比较份临床样本位点的测定结果,椒ㄓ隤/椒ㄓ泻好的一致性。结论鞘凳北展芊从Γ僮骷便,并大大降低了产物污染的可能性,结合熔解曲线分析,结果准关键词珼籗珿;基因分型:熔解曲线/中国协和医科大学硕士学位论文
—甅,瓺·琣篖:,瑆瑄猙琒中国协和医科大学硕士学位论文
.,中国协和医科大学硕士学位论文甋猻瑃甌瑃疭琣産../订
,猙.。,,—甶.,狣篐,籗珿;;中国协和医科大学硕士学位论文瓵甀.,
位点进行分型,其中位点要求采用基因分型。这对传统的血清学配型法由于其自身的限制性,已不能满足临床需要。室对瓺坏愕幕蚍中椭饕2捎肞—椒ǎ凳庇ü饧觳獾幕蚍中托路椒ā1臼笛橛τ昧擞ü馊玖胨碊有很高的亲和力。当它与双链目前器官移植在世界范围内广泛开展,器官移植前的组织配型对移植成功与否起着举足轻重的作用。近几年来骨髓干细胞移植技术的发展为治疗造血系统疾病开创了广阔的前景。在我国也相继建立干细胞库,进行干细胞移植。根据国际要求,临床肾移植、骨髓移植要求至少对狪类抗原位点和类抗原移植前的组织配型工作提出了更新更高的要求。对于类抗原基因分型法结果准确,操作易标准化,易于质控。目前临床实验需要在蠼心旱缬荆唤鲈黾恿瞬僮鞑街瑁胰菀自斐本研究以瓺、、、位点为例,建立一种被激发,发出的荧光在ǔご觳狻T贕产物污染【俊结合后,能产生增强的荧光信号。波长处扩中国协和医科大学硕士学位论文
挠ü饪梢员皇凳奔嗖鈌纬捎ü饫┰銮线。通过熔解曲线分析可判定反应结果,不需要扩增后的产物检测,简化了反应步骤,缩短了反应时间,而且实现了实时闭管检测,大大降低了产物污染的可能性。增仪中国协和医科大学硕士学位论文
北京东方特力科贸中心柱式锎炕约梁猩虾Iど锛际跤邢薰北京化学试剂有限公司一、材料扩增仪美国扩增仪多用电泳仪紫外透射分析仪北京仪诚科技公司万分之一电子天平约粒约梁约梁琼脂糖华美生物工程公司材料和方法瞧鳎美国德国氯仿异戊醇公司公司中国协和医科大学硕士学位论文
。下游引物疌荷嫌我’实验室董玢老师提供华美生物工程公司引物参考文献【可杓疲缮虾Iど锛际跤邢薰竞铣伞下游引物疌℃掠我℃掠我’粜匝采自北京红十字朝阳医院泌尿科门诊病人,由北京红十字朝阳医院泌尿科荷嫌我’疢℃中国协和医科大学硕士学位论文