文档介绍：中国协和医科大学
硕士学位论文
人表皮生长因子双位点突变体在甲基营养型酵母Pichia
pastoris中的表达、纯化和性质研究
姓名:郭东东
申请学位级别:硕士
专业:生物化学与分子生物学
指导教师:黄秉仁
摘要中被发现,,分ü胂赴砻娴奶匾哂泄惴旱拇碳は赴鲋匙饔茫捎谒酝馀卟愫湍谂卟憷丛吹囊恍┳橹写俜至和刺激合成代谢的作用,⊙、廉价的大规模生产方法,来满足对牧俅材酥寥粘P枰#宜诘氖笛槭依没重组技术已成功实现了个氨基酸残基的的高效表迭,并在此基础上开发出了滴眼液和烧伤软膏,,栽室积极与中科院生物物理所合作,;,我们知道双位点突变体的话性大致相当于两个单位点突变体的活性之积一这就是所谓的“累加效应”.我们所确定的突变体的目的有二:其一,改善峋跫⒌玫街柿扛玫木澹黄涠竦梦榷ㄐ愿茫兰甏跏紫仍谑蟮尿⑾孪偬崛∥受体结合引起受体二聚化,从而激活受体胞浆结构域的酪氨酸激酶活性,导致铣晒韵瘤细胞对胁煌姆从Γ阂恍┲琢鱿赴宰苑置诜绞皆鲋常硪恍┲
此菌株进行大规模摇瓶碚养,—耐槐洌庑蛘泛螅僖詐段,连八表达栽体,保留原有的蜃忧暗茧暮蚄顺序,,,所以只进行前两步纯化;纯化后的样品纯度可达%以上。用于结晶等生物物理方面的研究及理化、,双位点突变体具有与野生型相同的分子量,,得知突变体与野生型的相同,,前个氨基酸纽成正确,。産笛楸,突变体与抗体结合,,目的基因已稳定整合到酵母基因组中,即使经过在卸啻巫=樱挥跋炷康牡鞍椎姆置冢肕法测定的突变体的效型提高倍,┝擞幸娴乃悸罚参8慕鳨的生产工艺进行了有益的探索与尝试.—柿=槐洌辉俨庑颍砻髁礁瞿康奈坏憔⑸て谕槐洌盖校厥漳康钠瓻、.瓻,分别转化辏秆〉×.同时纯化的的效价为./..幕钚员纫吧中国协和医科大学硕士论文
,甌,.畐—.琣..,,畐.『產,.痜,.甀..
.瑂卜琌一..中国协和医科大学硕士论文州狾—篞“—瓵甿.—猂,.:—琾瓵..,.瓵甎甋...篹鑙.·;琻.
异丙基一狣喊代半乳糖苷缩略词表±里堡查垦壁垄兰堡主笙查氨苄青霉素环己胺一槐撬牛小肠碱性磷酸酶培养基表皮生长因子千碱基对唐访亨邕蚶甲醇利用正常甲醇利用缓慢醇氧化酶牛血清白蛋白疏水相互作用层析离子交换层析等电聚焦二苯基四氮唑溴盐;光密度缓冲液碱基对道尔顿二甲基亚砜辣根过氧化物酶—狣—奏邕蛞,过硫酸铵乙二胺四乙酸千道尔顿徊穚一卜粂—籧。‘
磷酸盐缓冲液聚合酶链式反应毕赤氏酵母酵母含氮碱基聚丙烯酰胺凝胶电泳聚乙烯叉二氟十二烷基磺酸钠四甲基乙二胺蝗羟甲基谆拾彼三羟甲基氨基甲烷聚乙二醇甤珽缓冲液撼逡衑綡术】,琋,琋
前言而和富舍荽彻鄣悖墙峁褂騃主要参与同配体的结合俊薄=昀从惺笛表皮生长因子紫扔暝谑蟮尿⑾旅撂崛∥镏斜环⑾郑时它被当做提取些作用很显然是由于刺激了上皮组织的生长,从而将它命名为表皮生长因子【浚且桓龅湫偷亩嚯男陨ひ蜃樱撕褪蟮腅都舍有个氨基酸残基,,其中的六个谢季萏囟ǖ目占湮恢谩尽瓻超家族成员为数众多,包括某些多肽性生长因子和一些无关蛋白:前者又称为易宄稍保笳咴蛏婕暗桨饣视胂胞间的粘附蛋白、胆固醇转运蛋白、以及与凝血相关的因子等【】.相嗟牡鞍拙哂卸喔鯡样结构域,例如:‘;,虽然只有其中的一个具有生长因子活性忠逊⑾