文档介绍：中国协和医科大学
博士学位论文
人载脂蛋白AI抑制ox-LDL诱导转基因小鼠血管平滑肌细胞增生
及脂质沉积分子病理学机制的研究
姓名:于淼
申请学位级别:博士
专业:病理学及病理生理学
指导教师:佘铭鹏
锼芩芏樾筒樘盟芾迹河っ凵帽だ蒇铡!摘要—跤煳S盏技せ钐跫6砸陨鲜鎏跫盏技せ畹膖动脉粥样硬化,枪谛牟『湍宰渲蟹⒉〉闹匾2±砘。心脑血管疾病是当前人类主要死因之一。对机制及防治的研究一直是科研及临床工作的重要课题。多年的研究表明,基本病理损害是有免疫系统参与的慢性炎症反应。尤其是新近一些基因打靶小鼠的研究结果为了解免疫机制参与动脉粥样硬化发病过程提供了有力的依据。这些结果也为探讨的分子机制及防治途径提供了新的思路。是一种多基因病,其发病不但受外部环境危险因素的影响,更重要的是有内在基因表达异常。从分子水平上探究发生发展各环节中基因表达的变化,是目前研究发病机制和防治途径的基本思路。氧化型低密度脂蛋白琽作为重要的促发因素一直倍受关注。与之相对应的是,大量证据表明高密度脂蛋白琀捌渲饕T刂鞍譇狪具有抗作用。本实验室所建的重组—;駽鯨/∈笙担H氲膆狪可通过常染色体稳定遗传,并可在多脏器纾焊巍⑸觥⒅鞫龅高效表达。已有工作分别从动物实验及细胞水平上证实这种小鼠是抗高脂及—翧睦硐肽P汀NQ有笆龉ぷ鳎冉原来对形成敏感的#珺小鼠在转入人—颍=薃狪水平明显升高并具有抗动脉内膜脂质沉积和粥样斑块形成的条件以后,和增生相关基因的变化,本实验试图筛选、克隆参与这一过程的相关基因,从分子生物学水平上探讨—翧癆狪抗的机制。本实验首先用蚇对用于取材的小鼠进行了鉴定,确认其有整合并表达,而后用改良贴块法原代培养其主动脉的平滑肌细胞,取传至第五代的为孵育对象。同时,以小鼠分裂指数最高为指标确定/证实有—虮泶锏脑黾樱乓徊饺啡洗嬖诳笰的保护性背景。而后采用新型减除杂交技术分离、克隆经上述条件诱导和非诱导~—蚇
—目獾味痬Hǔの目獾墓菇ㄎN票究翁獾慕徊窖芯康本实验筛选克隆到的差异表达衏籌与补体、凝血、纤溶与激肽释放差异表达基因,建立了减除文库,经蓝白斑筛选出近个白色克隆,经影印杂交筛选出个差异克隆,并用斑点杂交证实这些差异克隆均只在经诱导激活的中特异表达。随机从中选取个克隆行核苷酸序列分析及同源性比较,得到鯡,皆为与免疫系统有关的已知功能基因片段,它们是:补体芬种莆—一;植物凝聚素及赴芴錌A硗本实验用际豕菇薕狶诱导激活的全长噬菌体文库,平均长度定了基础。有密切联系,尤其是可调节补体活化途径及下调和细胞的功能,这些因子和动脉粥样硬化发病的关系值得作深入一步的研究。关键词:转基因小鼠平滑肌细胞氧化低密度脂蛋白载脂蛋白减除杂交表达序列标签文库动脉粥样硬化中国悱和医科大学博士研究生学位论文一
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前言动脉粥样硬化,枪谛牟『湍宰渲械闹饕2∫颍壳拔夜脑血管疾病的病死率位居各类疾病病死率之首、对其机制及防治的研究一直是科研及临床工作的重要课题。多年的研究,尤其是近二十年来飞速发展的心血管分子生物学研究成果证实:是脂质代谢异常、血液凝集因子、高血压,糖尿病,细胞因子、吸烟,血液动力学负荷、遗传、以及感染等多种因素相作用的结果,其基本病理损害是有免疫系统参与的慢性炎症反应“S绕涫切陆恍┳;蚨锖突虼虬行∈蟮研究结果为免疫机制参与动脉粥样硬化提供了有力的依据。U庑┏晒L教諥分子机制及防治途径提供了新的思路。在众多的致危险因素中,低密度脂蛋白琇纳高及其氧化后所形成的氧化型低密度脂蛋白琽狶佣喔龇矫娌斡階纬傻恼霾±砉桃恢北妒芄刈ⅰ。晚近的一些实验成果迸一步表明—芄辉贏”淝纬勺陨砜固澹せ钐液免疫及细胞免疫,并由此导致的形成“’。”。用—庖呓又帧保被蛴盏疾对—庖吣褪堋均可抑制病变的进展,表明鸬拿庖叻从赡经由不同路径参与的形成机制,这进一步拓展了探讨—翧乃悸贰动脉粥样硬化作为对多种损伤因素的炎性反应过程,其结缔组织是来自于血管平滑肌细胞贏±砉讨械淖饔涉及平滑肌增殖、脂质沉积、间质纤维组织增多、钙盐沉积等,并与血管壁结构改建所引起的管腔狭窄有关,是研究中重要的靶细胞。茉趏刺激下增加对胆固醇的摄取,迁移和增殖,导致血管内膜增厚和斑块形成“⋯。还是炎性细胞介质的重要靶向并可在刺激因素作用下自身产生大量炎性细胞介质,从而参与的炎性反应过程““”大量流行病学调查证实,高密度脂蛋白琀捌渲要载脂蛋白—接階孕难9懿》⑸世锩飨愿合喙亍=嗄昀醋;和基