文档介绍：第28卷,,ppl61—164January,2008血清白蛋白与小分子化合物相互作用的荧光光谱研究黄锐1’2,夏之宁¨,,,,重庆400030摘要以牛血清白蛋白一TritonX-100和牛血清白蛋白一盐酸西布曲明两个体系为实例,考察了以血清白蛋白和小分子化合物为荧光检测对象所获得的相互作用信息的差异。发现两种方法获得的分子间结合常数差异显著,说明在以血清白蛋白为检测对象的传统荧光光谱法中,以色氨酸基团的荧光光谱所表达的信息来代表整个蛋白分子的相互作用信息是不准确的。文章提出了以荧光小分子化合物为检测对象的改进荧光光谱方法和荧光背景扣除方法,前者能全面表达相互作用过程中分子的整体信息,后者实现了荧光光谱交叠体系的荧光光谱法相互作用分析。关键词血清白蛋白;相互作用分析}改进荧光光谱法中图分类号::A文章编号:1000-0593(2008)01-0161—04引言血清白蛋白(serumalbumin,SA)在哺乳动物体内起着重要的贮存和输运作用[1]。因此,SA与内源或外源物质的相互作用一直是是生命科学、临床医学和环境科学重要的研究课题。SA是一种内源性荧光大分子,用荧光光谱法可以简便、灵敏、直观地反映出它与其他物质之间的相互作用情况。所以,荧光光谱法成为人们研究血清白蛋白与其他物质相互作用的主要手段Ⅲ]。目前,在人们以SA为对象的相互作用研究中,通常以280~300nin的紫外光作为激发光,得到SA的最大荧光发射波长(A。)。处荧光强度值的变化可获得两者的相互作用信息。然而,SA含有20种氨基酸,其中只有芳香族类的三种氨基酸,即色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸具有荧光,它们又因其各自的发色团(侧链基团)不同而具有不同的荧光光谱,其A。分别为348,303和282nm[”。由此可见,传统的荧光光谱法得到的SA的荧光光谱只是色氨酸的荧光性质的反映。显然,SA中色氨酸所占比例是有限的,而其他19种氨基酸都可能参与到相互作用过程中,甚至具有更强的结合能力,但由于其他氨基酸不具有荧光或不能被检测到,它们与作用对象之间的结合信息不能体现在SA的荧光光谱上。因此,用色氨酸的荧光光谱所表达的信息来代表整个蛋白分子在相互作用过程中的变化情况是不准确的。我们认为,以SA为对象的传统荧光光谱法的不准确性是因为物质局部产生的信息被当作了整体信息。如果与SA作用的物质是具有荧光的小分子,那么,荧光小分子所表达的荧光信号是其分子性质的整体反映。因而,以小分子为检测对象,考察体系中SA对小分子荧光性质的影响,便能获得二者相互作用的准确信息。本文以牛血清白蛋白(bovineserumalbumin,ⅨIA)与TritonX-IOO(Tx)和盐酸西布曲明(sibutraminehydrochlo-ride,SH)相互作用体系为研究对象,分别以生物大分子(BSA)和小分子(TX,SH)为荧光源,对体系的相互作用进行了荧光光谱法研究,获得了其各自的结合常数,,并通过紫外光谱法对其结果进行了验证。1