分离线粒体.doc

文档介绍：从细胞、组织中分离线粒体——差速离心法所需缓冲液:RSB(使细胞膨胀的低渗缓冲液)10mMNaCl(Mr=)(Mr=)10mMTris-Cl():,·6H2O,10ml1MTris-Cl(),,加水定容至1000ml。×MS缓冲液(MS缓冲液是用来保持细胞器张力的等渗缓冲液)525mM甘露醇(Mr=)175mM蔗糖(Mr=)-Cl()():,,加150ml水溶解,-Cl(),(),,加水定容至200ml。 1×MS缓冲液210mM甘露醇70mM蔗糖5mMTris-Cl()1mMEDTA() 配法:,,加800ml水溶解,加5ml1MTris-Cl(),(),,加水定容至1000ml。注意事项:溶液、离心管应在冰上预冷,所有离心步骤都要在40C进行。从细胞中分离线粒体:,加5ml培液,转入10ml离心管中,1000rpm离心5min,弃上清,加5mlPBS,1000rpm离心5min,弃上清;悬浮细胞直接转入10ml离心管中,1000rpm离心5min,弃上清,加5mlPBS,1000rpm离心5min,弃上清。,让细胞膨胀10min,加3×61uLPMSF贮液,在冰上匀浆,转速不宜过快。,×MS缓冲液至终浓度为1×MS。、未破碎