文档介绍：免疫实验操作题——乙肝两对半的检测:原理:HBsAg:双抗体夹心法(两步法:消除钩状效应)将抗HBs包被在固相载体上,加待测标本,经孵育后洗涤,加入酶标抗HBs,形成固相载体-抗HBs-HBsAg-酶标抗HBs免疫复合物。加底物后,复合物中的酶将底物催化成为有色产物,根据颜色的深浅进行HBsAg的定性或定量。HBsAb:双抗原夹心法将HBsAg包被在固相载体上,加待测标本,经孵育后洗涤,加入酶标HBsAg,形成固相载体-HBsAg-HBsAb-酶标HBsAg免疫复合物。加底物后,复合物中的酶将底物催化成为有色产物,根据颜色的深浅进行HBsAb的定性或定量。HBeAg:双抗体夹心法将抗HBe包被在固相载体上,加待测标本,经孵育后洗涤,加入酶标抗HBe,形成固相载体-抗HBe-HBeAg-酶标抗HBe免疫复合物。加底物后,复合物中的酶将底物催化成为有色产物,根据颜色的深浅进行HBeAg的定性或定量。HBeAb:中和竞争法(待测样本的HBeAb与固相抗体竞争结合中和抗原HBeAg)HBcAb:竞争抑制法将HBcAg包被在固相载体上,同时加入待测样本和酶标抗HBc,酶标抗HBc与待测样本中的抗HBc竞争结合固相HBcAg,加入酶底物显色,显色的深浅与待测样本中的HBcAb含量呈负相关。试剂与器材:试剂盒组成::::分A、:阳性对照,(配制洗涤液:用蒸馏水按1:20稀释浓缩洗涤液)(只有检测HBeAb的试剂盒才有)操作步骤:1、加样:第一、二孔为阴、阳对照孔,分别加入阴、阳对照50ul。其余各孔为样品孔,各加入待测标本50ul(检测HBcAb时,待测标本需用稀释后的洗涤液做1:30稀释)。2、加中和试剂(只有检测HBeAb时才需要):每孔50ul3、加酶结合物:每孔50ul4、温育:封板→充分混匀后置37°C水浴30分钟5、洗涤:弃去反应条孔内液体,用洗涤液注满每孔,放置或振荡1分钟,弃去拍干→反复5次(注意:最后一次一定要拍干)6、显色:每孔先加显色剂A50ul,再加显色剂B50ul,混匀后置37°C水浴10分钟7、中止显色:每孔加入中止液50ul8、判断结果注意事项:标本:内源性和外源性因素试剂:试剂质量、批号、是否失效、平衡、摇匀加样:不可太快,避免加在上部和产生气泡。加试剂时不可重复加和漏加,或加在两孔之间。温育:温度、时间、湿度、封片洗板:手工或仪器比色:建议双波长比色。结果判定:反应终止后10分钟内质量控制:内对照、室内质控、室间质评等表面抗原阳性结果建议复查;灰区标本和矛盾结果建议复查试剂盒应视为有传染性物质。结果分析与判断:①目测法:HBsAg,HBsAb,HBeAg:透明无色—阴性,黄色—阳性HBeAb,HBcAb:透明无色—阳性,黄色—阴性②比色法:波长450nm读取各孔OD值,阳性如下:HBsAg,HBsAb,HBeAg样品OD值/阴性对照OD值≥,HBcAb阴性对照OD值/样品OD值≥(建议双波长比色(450/630nm)临床意义:模式 HBsAg HBsAb HBeAg HBeAb HBcAb 临床意义 1+-+-+①急性乙肝 ②慢性乙肝 ③病毒复制活跃,传染性强 2+---+①急性HB