文档介绍：中国协和医科大学
博士学位论文
克拉霉素对体外循环肺损伤保护作用的动物实验和相关基础研
究
姓名:范祥明
申请学位级别:博士
专业:心血管外科
指导教师:刘迎龙
中英文对照表环磷酸腺苷体外循环碘化吡啶中性粒细胞二甲基联苯胺过氧化物酶粒细胞集落刺激因子肺血管阻力粒细胞巨噬细胞集落刺激因子核糖核酸酶辣根过氧化物酶脱氧核菅酸末端转移酶白细胞介素卜转换酶白细胞介素乳酸脱氢酶脂多糖丙二醛髓过氧化物酶辅酶一一氧化氮肺动脉压肺毛楔压磷酸盐缓冲液肿瘤坏死因子肿瘤坏死因子受体原位末端标记法中垦协秘医科大学辫士论文—
撬克苄颓邓考中文摘要一一、克拉霉素对中性粒细胞凋亡的诱导作用及对其活性影响的体外实验研究目的:中性粒细胞在炎症反应过程中起着重要的作用。衰老的中性粒细胞以凋亡的方式为巨噬细胞所识别并吞噬,这种细胞清除方式对炎症的控制和正常消散都有重要的意义。研究证实,多种大环内酯类抗菌素能影响中性粒细胞的功能,并诱导其凋亡。克拉霉素是新型圆环大环内酯类抗菌素,其组织半衰期长,能在周围组织形成较高的药物浓度。本研究观察克拉霉素对体外中性粒细胞的凋亡诱导作用以及对中性粒细胞活性的影响。方法:赴掷胍禾荻让芏壤胄姆掷氲弥行粤O赴琑赴养基培养小时,实验组加入不同浓度的克拉霉素、、盼蓝染色,镜下观察细胞存活率。分别以流式细胞仪和原位末端标记法检测培养细胞的凋亡率。免疫组化法观察中性粒细胞凋亡相关基因蛋白蚥一的表达情况。提取细胞培养液的上清,分别用比色法检测上清液中乳酸脱氢酶、髓过氧化物酶和活性氧的变化。结果:克拉霉素明显缩短中性粒细胞的生存期,且浓度在痬陨鲜保其作用达到最大。克拉霉索组小时中性粒细胞生存率为:槲槲±%、槲±%,明显低于对照组的..。流式细胞仪检测结果显示克拉霉素组小时凋亡率为:±%.T末端标记法检测对照组中性粒细胞培养小时的凋亡率为.%低于实验组的..。免疫组化染色结果显示实验组谋泶痬。台±%、%、,
保护作用的动物实验研究二、克拉霉素对体外循环肺损伤较对照组明显增高。,,实验组髓过氧化物酶活性../飨缘陀诙哉兆±痬,实验组活性氧浓度±疞步隙哉兆/低结论:克拉霉素能促进中性粒细胞凋亡,缩短其生存期,这可能与克拉霉素影响了凋亡相关基因蚥一谋泶镉泄兀笨死顾鼗鼓芗跎僦行粤O胞乳酸脱氢酶,髓过氧化物酶和活性氧的减少,减轻中性粒细胞所致的炎症反目的体外循环造成的炎症反应可导致肺血管内皮细胞和肺泡上皮细胞损伤,使术后肺功能受损。中性粒细胞在体外循环肺损伤中的作用越来越受到关注。研究证实,多种大环内酯类抗菌素能影响中性粒细胞的功能,并诱导其凋亡。克拉霉素是新型大环内酯类抗菌素,其组织半衰期长,能在周围组织形成较高的药物浓度。本研究采用体外循环动物模型观察克拉霉素对体外循环所致肺损伤的保护作用。方法只绵羊,体重±,随机分为椋孔只。槲5头肿右旋锗酐肺动脉灌注组;槲5头肿佑倚囚克拉霉素痥肺动脉灌注组。实验羊麻醉后常规建立体外循环。主动脉不阻断,经肺动脉根部灌注肺,应。中国格萃“医科大学博士论文
保护液/L逋庋种雍蟪防胩逋庋坊⑽盅肺榷ǎ谑后小时处死实验羊。术中观察肺血管阻力、气道峰压及动脉血气,同时抽动脉血检测髓过氧化物酶、丙二醛、乳酸脱氢酶和细胞因子白细胞介素一细胞介素一椭琢龌邓酪蜃优ǘ取J笛榻崾笞髦芊闻莨嘞矗羧∠赴及支气管肺泡灌洗液并作支气管肺泡灌洗液内炎症因子的测定,同时取肺组织作光镜和电镜检查,了解肺组织形态学改变,并对切片作原位末端标记免疫组化染色观察肺泡内渗出的中性粒细胞凋亡情况。结果两组均有鹾笤缙谒劳觯溆喔骼荚谑鹾∈贝λ馈7伪;组气道峰压低于对照组,术后、;ぷ榉血管阻力低于对照组,术后∈辈钜煜灾.、:肺保护组氧指数较对照组高,术后∈辈钜煜灾;肺保护组血浆髓过氧化物酶低于对照组,术后、;组血浆丙二醛低于对照组,术后∈辈钜煜灾:肺保护组血浆乳酸脱氢酶低于对照组,术后∈辈钜煜灾;肺保护组血浆白细胞介素一陀诙哉兆椋尴灾圆钜欤环伪;ぷ檠=紫赴樗匾低于对照组,术后、小时差异显著.、.环伪;ぷ血浆肿瘤坏死因子低于对照组,术后】∈辈钜煜灾;;ぷ橹芊闻莨嘞匆内髓过氧化物酶、丙二醛、;ぷ橹气管肺泡灌洗液内细胞因子白细胞介素~;ぷ橹芊闻莨嘞匆耗谥行粤O赴壤∮;ぷ榉巫橹8杀鹊陀诙哉兆;肺组织形态学观察显示,光镜下可见对照组肺泡毛细血管充血、出血,肺泡及间质水肿,有中性粒细胞等炎细胞浸润,透射电镜可见肺泡腔内有红细胞出现及中性粒细胞等炎细胞浸润,肺泡型上皮细胞线粒体及内质网肿胀,空泡变性,板层小