文档介绍：青岛大学
硕士学位论文
免疫系统来源的细胞内β-肾上腺素能受体mRNA的原位杂交检测
姓名:张宝刚
申请学位级别:硕士
专业:病理学与病理生理学
指导教师:纪祥瑞
簧錾舷偎啬苁芴錷脑辉咏患觳免疫系统来源的细胞内进行了定性检测。用光学显微镜观察了原位杂交结果,记数每个在淋巴组织内分布稀疏。病理专业纪祥瑞教授目的:本研究采用原位杂交技术对淋巴组织免疫细胞内簧錾舷偎啬苁体的进行了检测,旨在寻求免疫系统来源的细胞表面存在一肾上腺素能受体的形态学证据,并比较三种一肾上腺素能受体亚型在免疫细胞的分布情况,为进一步研究交感神经系统对免疫系统的调节提供证据。方法:对人例淋巴结、⒃唷例小肠黏膜固有层淋巴组织进行连续冰冻切片,⒂。结果:淋巴组织内存在三种錾舷偎啬苁芴宓难粜韵赴珺芴逖粜韵赴拷隙啵辉诹馨徒帷⑵脏及肠黏膜淋巴组织内大部分呈弥漫分布,少数区域阳性细胞数量较多,这些区域为淋巴结和脾脏内淋巴管及小梁、网状支架分布密集区域:阳性细胞数量较少,在淋巴组织内呈弥漫分布;芴逖粜韵赴拷仙伲芴逖粜韵赴骄,±.个阳性细胞/个高倍镜视野,个高倍镜视野,倍镜视野。统计学分析表明:三种一肾上腺素能受体中芴宓难粜韵赴冉厦挥型臣蒲б庖。结论:在人类免疫系统来源的细胞内存在三种簧錾舷偎啬苁芴宓膍=桓猩窬ü去甲。:淋巴组织肾上腺素能,。受体亚型形恼R青岛大学医学院级导师张宝刚虰中文摘要
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免疫系统来源的细胞内簧錾舷偎啬苁芴錷脑辉咏患觳引言年以来的研究结果表明:交感一‘障上腺素能神经系统可以调节机体的免疫功能““。淋巴器官有交感神经纤维支配“’涫头诺娜ゼ咨錾舷偎乜梢缘体实现的”’⋯。近年来有关淋巴细胞表面存在哪一种錾舷偎啬苁芴宓难了淋巴组织免疫细胞内的三种簧錾舷偎啬苁芴宓膍梅肿由镅神经系统和免疫系统是人体的两大调节系统,两者相互作用,相互调节,使机体适应内外环境的变化。传统上认为:去甲肾上腺素和交感神经系统与人体的“应急”反应有关,并且在机体的自主性活动中起重要作用。最近节免疫细胞的功能,这一调节作用是通过位于免疫细胞膜上的肾上腺素能受究尚存在一些争议,目前关于免疫细胞上的簧錾舷偎啬苁芴宓难芯糠椒ㄖ要有放射性配体结合法和用受体的特异性抗体进行的免疫组织化学技术法”’⋯,大部分研究结果显示:淋巴细胞表面主要存在肾上腺素能受体。本研究采用针对每一种受体设计的地高辛标记寡核苷酸探针原位杂交技术检测技术与形态学结合的方法,寻求免疫细胞上存在芴宓闹ぞ荩云谔教纸感神经系统与免疫系统之间的作用机制及方式。将来的研究重点是去甲肾上腺素影响免疫细胞的分子机制。这些机制的阐明,可能应用拟肾上腺素类药物调节人体免疫功能,治疗自身免疫疾病和免疫缺陷疾病,从而将开拓新的治疗前景。第一章引言
牧嫌敕椒原位杂交主要试剂及来源研究对象主要仪器及生产厂家收集青岛大学医学院附属医院病理科年轮录渌图炝馨徒例、脾脏⒊︷つち馨妥橹例,共计淋巴组织例,所有标本均为新鲜组织,并进行连续冰冻切片。全部例年龄分布为—岁。例淋巴结为肿瘤患者的清扫淋巴结,,均为男性。︷つち馨妥橹∽猿χ琢龌颊叩幕爻︷つち馨妥橹信人。全部淋巴组织均经染色,确保无肿瘤转移、无感染等特殊改变。所有标本均进行芴錷辉咏患觳狻8菸南妆ǖ馈,将心肌组织、肺组织和膀胱平滑肌组织分别作为含探针的杂交液作为阴性对照。寡核苷酸探针地高辛尾段端标记试剂盒杂交液绵羊抗地高辛抗体普通光学显微镜杂交炉美国吞ㄊ嚼胄幕了肾上腺素能芴濉芴搴虰虰难粜远哉眨貌疊陨约梁冰冻切片机制冰机德国统臀卤摇床烤箱上海生工公司合成上海生工公司日本美国美国—公司中国台湾公司第二章材料与方法透哐瓜竟公司德国
探针的设计实验过程水浴箱原位杂交成功的关键在于确保探针的特异性和敏感性,针对三种受体的基因结构特点,我们在原位杂交实验中为每一种受体设计了两条探针。先从基因库中分别查出每一受体的基因结构:用每一种受体的基因在基因库内与另外的两种受体的基因对比,将每一受体基因软件中的“探针与引物设计功能”并将受体基因的特异部位输砑杓坪锰秸牒螅俅谓秸胧淙隚斜榷裕认该探针与其他基因没有同源性,确保了设计出的探针的特异性。.夭F褪笛橛镁叩拇由于本实