文档介绍：目的本文件用于验证洁净区按照规定的消毒程序消毒能够达到消毒、防止污染的目的,在消毒有效期内能确保其消毒效力符合要求。背景公司拟定用75%%新洁尔灭对洁净区进行清洁消毒,两种消毒液每周进行更换,防止耐药菌株的产生,%84消毒液进行洁净服的消毒,本验证是为了确定消毒剂的消毒效果所作的验证,以确认该消毒剂是否能满足需要。范围本验证用于验证消毒剂消毒效力的测试。参考文件《消毒液配制使用管理程序(SOP-030)》、《检定菌管理程序(SOP-022)》术语和定义N/A职责质量法规部负责本验证方案的制定,验证的执行和完成验证报告;微生物组负责验证中相关的测试;生产技术部和质量法规部负责本方案和报告的审核;材料和设备材料表1材料清单序号材料名称备注1金黄色葡萄球菌――2大肠埃希菌――3枯草芽孢杆菌――4白色念珠菌――设备表2设备清单序号设备名称设备型号设备编号1生化培养箱SHP-0802霉菌培养箱MJP-150验证程序为了确认消毒剂的消毒效力,经过定量悬浮试验法和表面实验法进行验证试验。中和剂的选择:经过该试验,确认所用的中和剂对对应的消毒剂有良好的中和作用,对试验用菌及其恢复期培养是否有害或不良影响。菌种:大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌。消毒剂的配制浓度:乙醇溶液配制成75%的浓度、%的浓度、%的浓度。中和剂的选择:乙醇采用3%吐温80为中和剂,新洁尔灭1%的卵磷脂+%吐温80为中和剂,%硫代硫酸钠为中和剂。3%吐温80配制方法:,加纯化水至100ml,121℃高压灭菌15分钟,即可。1%的卵磷脂+%吐温80配制方法:卵磷脂1g,,121℃高压灭菌15分钟,即可。%硫代硫酸钠配制方法:,加纯化水稀释至100ml,121℃高压灭菌15分钟,即可。进行中和剂选择试验时需设置平行6组实验:第一组消毒剂+菌悬液;第二组(消毒剂+菌悬液)+中和剂;第三组中和剂+菌悬液;第四组(消毒剂+中和剂)+菌悬液;%***化钠溶液+菌悬液;第六组稀释液+中和剂。●第1组目的:观察消毒液对试验菌有无杀灭或抑制能力。操作方法:,(含菌量为1×108cfu/ml~5×108cfu/ml),混匀。作用10分钟,。,接种于平皿中,做活菌培养计数。金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌用TSA培养基;白色念珠菌用SDA培养基。●第2组目的:观察残留消毒剂被中和后受到消毒剂作用后的试验菌是否恢复生长。操作方法:,,混匀,作用10分钟,,,作用10分钟,,,接种于平皿中,做活菌培养计数。●第3组目的:观察中和剂是否有抑菌性。操作方法:,,混匀,作用10分钟,,用稀释液做10倍系列稀释至10-3,,分别接种于平皿中,做活菌培养计数。●第4组目的:观察中和产物,或未被完全中和残留消毒剂对试验菌的生长繁殖是否有影响。操作方法:吸取中和产物溶液(以1份消毒剂加9份中和剂,作用10分钟配制而成),,混匀,作用10分钟,,用中和产物溶液做10倍系列稀释,稀释至10-3,,分别接种于平皿中,做活菌培养计数。●第5组目的:作菌落数对照用。操作方法:,,混匀,作用10分钟,,用稀释液做10倍系列稀释至10-3,,分别接种于平皿中,做活菌培养计数。●第6组目的:作为阴性对照用。操作方法:,倒入上述试验同批次的培养基15ml~20ml,培养观察。如出现细菌生长,可能提示试验材料或操作过程中有污染,应重新进行试验。样品培养:大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌于30~35℃培养3天,白色念珠菌于20~25℃培养5天,培养结束后点计菌落数。结果判定:第6组无菌生长第3、4、5组有相似菌落数生长,其每组间菌落数误差率不超过15%,计算公式如下:误差率=3组间菌落平均数-各组菌落平均数的绝对值之和3×3组间菌落平均数×100%第1组无菌生长或仅有少数试验菌菌落生长第2组菌落数比第1