文档介绍：ELISA 实验操作标准化化注意事项
北北京天之泰生物科技有限公司
酶联免疫吸吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay ),简称 ELISA ,其是以免疫学
反应为基础,通过抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化化作用相结合起来的一种敏
感性很高的试验技术。因其特异性强、敏感性高、可进行批量样品品的检测、操作简便、节省
时间、结果客观准确、安全性高等优点,从上世纪 70 年代建立此方法后开始应用于临床检
测。1997 年后,ELISA 诊断试剂剂盒逐渐被我国大型养殖企业、兽医诊断实验室和和科研单位
所接受,在生产、科研中发挥着重要作用。应用 ELISA 诊断试剂剂盒,可以进行动动态监测及
疾病诊断,通过抗体水平的变化化来评估疫苗接种的成功功与否,并在免疫失败的时候对其进行
纠正,改进和和优化化免疫程序,为疫苗免疫投入提供评估。但实验操作的各个环节对实验的检
测效果影响响较大,如不注意,有可能导致显色不全、花板等结果。为取得准确的实验结果,
保证实验室之间数据的共享与比较成为可能,ELISA 实验必须实现操作技术的标准化化。现
将相关问题论述如下:
1 试剂剂盒的选择
ELISA 试剂剂盒的优质质量是保证实验准确性的基础,在做畜禽抗体或抗原检测时应选
择官方认可、广泛使用的试剂剂盒,如法国 LSI 、美国 IDEXX 、荷兰 Biocheck 等知名品品牌,
其在试剂剂盒保存时间、孔间差、批间差等质量体系比较完善,为得到到可靠的数据提供了保证;
在冷藏条件下(2℃-8℃)保存试剂剂盒是保证其在有效期内能正常使用的重要条件;保存试
剂剂的冰箱应定期检查其贮存温度,并尽量避免冰箱频繁开关;避免运输中使试剂剂盒暴露在常
温或高温下过长时间,在泡沫保温箱中(加加冰)储藏或运输时间不应超过 4 天;收到到试剂剂盒
后首先应检查冰块融化化与否,外包包装是否破损等情况。
2 样品品的准备
体液、组织、分泌物和和排泄物等均可作为待检样品品,但常用的是血清或血浆。血样要求
新鲜、无溶血、无沉淀、均匀匀。血浆样品品要使用含有抗凝剂剂的采血管采血,颠倒混匀匀放置一
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段时间后,3000rpm 离心 15 分钟;血清样品品在非抗凝自然凝固 1-2 小时,3000rpm 离心 15
分钟。所有样品品尽量避免溶血,严重溶血和和高血脂的样品品弃之不用。待检样品品宜在新鲜时检
测,若需 5 天内检测,可使用冰箱 2℃-8℃保存,超过一周周时间测定,应于-20 ℃低温冻存。
反复冻溶会使抗体效价跌落,所以测抗体的血清标本如需做多次检测,宜少量分装冻存。
3 试剂剂盒的回温
试剂剂盒中所有试剂剂和和板条均应在实验前前平衡至室温(约 25 ℃),一般需在室温放置 1 小时
左右,平衡时间的长短与室温有直接关系,室温较低的应适当延长回温的时间,否则时间太
短会造成试剂剂混匀匀不够,样品品孵育时间相对缩短,ELISA 反应不够充分,易造成显色淡,
敏感度降低。
回温时将试剂剂盒打开,使各个内容试剂剂瓶充分接触室温以保证充分回温;试剂剂盒应避免
放在大理石、金属等温度传导快的实验台面,同时不要为使试剂剂盒快速回温而放在太阳直射
的地方;冬季室温