文档介绍：中国海洋大学
博士学位论文
Pseudoalteromonas -913的κ-卡拉胶酶酶学性质及酶解
产物分析
姓名:马悦欣
申请学位级别:博士
专业:水产养殖
指导教师:董双林;江晓路
20080615
腒ɡ好该秆灾始埃酶解产物分析摘要本论文目的是从海洋环境筛选高活性的ɡ好覆辏陨秆【的产酶培养条件和培养基进行优化,在此基础上对该菌株进行诱变以提高其酶活力,纯化其ɡ好福⒀芯扛妹傅拿秆灾剩么嗣钢票竢卡拉胶寡糖,并对其酶解产物的组成和结构进行分析,为ɡ好该钢萍撩豄ɡ寡糖的工业化生产提供理论和技术支撑。通过富集培养技术、初筛和复筛方法从多种海藻和刺参肠道筛选出株具有ɡ航到饣钚缘木辏渲写哟参肠道筛选出的瓴富盍ψ罡撸R谰菪翁Ш蜕硌特征及基因序列分析,将该菌株鉴定为假交替单胞菌属ü冉戏⑾指镁暧胍驯ǖ栏檬糁械奈┮。#痳⒔又至%、、培养温度℃:最佳培养基组成为:⒕辏贤庀摺⒓谆磺酸乙酯复合诱变和自然选育,获得一株酶活力显著提高的突变株.⒔。对该突变株进行液体发酵制备出卡拉胶酶酶液,通过%一%硫酸铵分级沉淀、汗瞬阄龊虲幌宋衾胱咏换徊确定此ɡ好傅姆肿恿课基酸序列为瓹,通过与已报道细菌一卡拉胶酶的荒┒氨基酸序列比较,没有发现与该酶同样的末端氨基酸序列,。通过单因素试验和Ⅱ三角瓶装入发酵培养基、摇床转速疞、牛肉膏疞、疞、·疞、疞、疞。以析技术对一卡拉胶酶进行纯化和精制,获得电泳纯度的酶蛋白组份,狿2捎肊降解法测得该酶的税,≮#
显的量效关系,表明新卡拉寡糖可干扰薘向细胞的吸附。,荒诿岩籇肴樘遣谢一硫酸基一半乳糖之间的,擒ɡ好浮2捎玫鹊缇劢构暧静獾酶妹傅牡鹊绲鉷,为。通过对该酶酶学性质研究,确定该酶反应的最适范围为颐富盍υ趐..段比较稳定,最适温度为℃,酶活力在℃下稳定,但经℃一℃处理サ拿富盍ιナВ钍蔔ǘ/鹗衾胱覼珻虲几乎完全抑制酶的活性。动力学参数测定结果表明,菌株的ɡ酶水解卡拉胶符合米氏动力学方程,采用双倒数法作图法求得其米氏常数/。甑腒ɡ好缸潘鈘卡拉胶,对缓腿胍豢ɡ汉颓碇敲挥兴庾饔谩@肁—晁腒ɡ酶对ɡ航忻附庵票竢卡拉胶寡糖,通过电喷雾离子化飞行时间质谱键,产生一内醚一胪半乳糖作为非还原端,旷半乳糖作为还原端的一新卡拉寡糖,主要产物是新卡拉二糖硫酸盐、新卡拉四糖硫酸盐、一新卡拉六糖硫酸盐、恍驴ɡ颂橇蛩嵫魏蚄驴ɡ橇蛩嵫危胍驯ǖ老妇腒ɡ胶酶的酶解产物有所不同。寡糖的抗病毒活性实验显示,的一新卡拉寡接对单纯疱疹病毒的吸附有抑制作用,并且呈现明关键词:豢ɡ好福患俳惶娴グ簦籏驴ɡ烟牵幻阜ㄖ票—狹和狽分析该酶的水解产物,确定该豢ɡ好缸潘/一豨/●’
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学位论文储签名芳蟛彦乏签字醐。。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含未获得用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。
学位论文作者签名:粤屹孜导师签字:/签字日期:乒。淳舌月倜签字日期乡∞沪∥月学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。本人授权学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》,并通过网络向社会公众提供信息服务。C艿难宦畚脑诮饷芎笫视帽臼谌ㄊ‘‘
第一章文献综述把卡拉胶是一类从某些红藻细胞壁中提取的硫酸胶体多糖。我国每年卡拉胶产量近蚨郑壳目ɡ河糜谑称芳坝胧称废喙毓ひ担溆糜谝药、轻工、纺织、化工和化妆品领域。近年来海藻多糖类药物的研究受到高度重视,多糖被认为是一种广谱的非特异性免疫促进剂,能够增强人体的细胞免疫和体液免疫功能,可激活巨噬细胞,促进抗体的形成,激活补体及诱导产生干扰素等。由于未降解卡拉胶粘度大、扩散困难,很难被机体吸收,而且毒性大,严重限制了卡拉胶的应用。在这种形势下,人们逐渐认识到卡拉胶降解形理活性,如抗病毒、抗肿瘤、抗溃疡、抗凝血等。利用从海洋微生物提取的卡拉胶