文档介绍：实验一硫酸铜标准曲线的制作一、目的与要求1、掌握分光光度比色法的基本原理和应用;2、熟悉标准曲线的意义及掌握制作方法;3、了解光谱光度法技术的具体内容及应用;4、了解回归分析法。二、原理光电比色法是根据溶液颜色深浅的比较来测定物质含量的一种方法。因此,在原理上应用了有色溶液对光吸收的物理定律即Lambert-Beer定律。常用的光电比色法::分析大批样品时,采用此法比较方便,但需要事先制作一条标准曲线((或称工作曲线),以供一段时间使用。配制一系列浓度由小到大的标准溶液,在溶液吸收最大的波长下,测出它们的吸光度。在标准溶液的一定浓度范围内,溶液的浓度与其吸光度之间呈直线关系,即被测物质对光的吸收符合Lambert-Beer定律,则必然会得到一条通过原点的直线,即标准曲线(见图1)。以各标准溶液的浓度为横坐标,相应的吸光度(A)为纵坐标,在方格坐标纸上绘出标准曲线,在制作标准曲线时,测出的数据至少要有三个落在直线上,这样的标准曲线方可使用。比色测定待测样品时,操作条件应与制作标准曲线时相同。测出吸光度后,从标准曲线上可以直接查出它的浓度,并计算出待测物质以后只要测定条件不变,将测出的样品溶液吸光订值代入该回归方程式,则可计算出样品溶液的浓度。(即标准比较法):在相同的条件下,配制标准溶液和待测样样品溶液的有色溶液,并测定它们的吸光度。由两者吸光度的比较,可以求出待测样品溶液的浓度。待测样品溶液的浓度=待测样品溶液的吸光度×(即计算因数法):此法较上两法更为简单。将多次测定标准溶液的吸光度算出平均值后,按下式求出标准系数。标准系数=:将制作标准曲线的各种标准溶液浓度的数值,与其相应的吸光度值,用数理统计中的回归分析法求出一个回归方程式。以后只要测定条件不变,将测出的样品溶液吸光度值代入该回归方程式,则可计算出样品溶液的浓度。三、(含铜量20000μg/ml):精确称取CuSO4·,置于100ml烧杯中,,移入500ml容量瓶中,,洗液一并转入容量瓶中,,将该液放置阴凉处,如发现沉淀混浊,应重新配制。:用5ml移液管,按下表要求,,摇匀,置阴凉处备用。编号应用标准液浓度(μg/ml)贮备标准液(20000μg/ml,ml)(ml):分别从编号试管中,吸取硫酸铜应用标准液,加到光径1cm的比色杯中。用分光光度计,,在690nm波长处,测定1-4号试管中溶液的吸光度(A);每一溶液重复测3次,取其平均值,以各试管浓度为横坐标,各试管溶液的吸光值为纵坐标,用坐标纸绘制出硫酸铜标准曲线。:取未知硫酸铜溶液加入比色杯中(若过浓可稀释5-10倍),用分光光度计,在690nm波长处测定吸光度。以此吸光度值可在硫酸铜标准曲线