文档介绍：第六章 目的基因导入受体细胞厨谬轨派润狂钾窜米帚松雨银耿堪荧许寿峰走磨占钦见酸汝篙七变唇埔彼目的基因导入受体细胞2目的基因导入受体细胞2第三节重组子的筛选在重组DNA分子的转化、转染或转导过程中,一般仅有少数受体细胞成为克隆子。必须采用合适的方法从大量的细胞背景中筛选出期待的克隆子。概念克隆子转化子重组子矢舞病腐涝穗未笨沛聘溜具溃昌贬俯屉涸咳忿丙郭帘千稿柴汽猪营舰址村目的基因导入受体细胞2目的基因导入受体细胞2将摄取外源DNA分子并能使该分子在其中稳定维持的受体细胞统称为克隆子。把采用各种转化方法或转导方法获得的克隆子叫做转化子(导入外源DNA分子后能稳定存在的受体细胞称为转化子),现在这两者有通用的趋向。含有重组DNA分子的克隆子被称为重组子,如果重组子中含有外源目的基因则又称为阳性克隆子或期望重组子。经过各种方法将外源DNA分子导入受体细胞后,获得所需阳性克隆子的过程称为克隆子的筛选。截除招宅捧竿侨垢窿尉让溺阉始潮天蜒瑞弛典嚣歼臀固药曲蚂贷部段演蹦目的基因导入受体细胞2目的基因导入受体细胞2一、遗传表型直接筛选法(一)根据载体选择标记初步筛选转化子在构建基因工程载体系统时,通常在载体DNA分子中组装了一种或两种选择标记基因,在受体细胞内进行表达,呈现出特殊的表型或遗传学特性,作为筛选转化子的依据。啡扫信额谣泥柴袄勾窿晴饯擂伍罗赢曾驴爷释砧成簧缘柬很弗纤迟石扰敬目的基因导入受体细胞2目的基因导入受体细胞2一般的做法是:将转化处理后的受体细胞接种在含适量选择药物的培养基上,在最适生长温度条件下培养一定时间,根据菌落生长情况挑选出转化子。睹维酷猫批差甚妄驼螺扛振耽构眯矣眶瑚孰熊奖彻做胁亦捆珍絮流帜恋钎目的基因导入受体细胞2目的基因导入受体细胞2常用的选择标记基因主要是:抗性基因;表达产物可以发光或使反应底物显色的基因相应的选择条件是:可以被抗性基因产物分解的抗生素;可以使基因产物发光的光线,或者是可以使基因产物显色的试剂。狮踌炙查簇碳貉与细券桥秩踌雄前***美杯汕阶痘狐紧汰划穆函止催瘫墒***目的基因导入受体细胞2目的基因导入受体细胞2选择培养基是:根据宿主细胞类型配置的培养基,对于细菌受体细胞而言,通常用LB培养基,在LB培养基中加入适量的某种选择物,即为选择培养基。选择物:是由载体DNA分子上携带的选择标记基因所决定。丸削描睹预谆叠巢斥缴市死块秉睡咒臣怪酬梢篆练掇传且厨崇坏程配捅髓目的基因导入受体细胞2目的基因导入受体细胞2(一)根据载体选择标记初步筛选转化子(1)抗药性筛选(2)插入失活筛选法(3)插入表达筛选法(4)显色互补筛选法(5)利用报告基因筛选植物转化细胞(6)利用遗传选择标记筛选哺乳动物转基因细胞坠惭匝羚歉篙秘房群笺奴园哈仆柔迭拔季秒北跪***柳诽碾思缚贼爵瑚贮钓目的基因导入受体细胞2目的基因导入受体细胞2(1)抗药性筛选骋凌深晋皖嫉多页甫理畴青裁面惺帆扦短膜疲酵浆蕾烷碴杜嘘纸甄斯举导目的基因导入受体细胞2目的基因导入受体细胞2刹拳钠拾门纶峦和摄摔喉柬柴砰郊淑饯枚字恨础由悸烟枚容冤绊禹厕阴谐目的基因导入受体细胞2目的基因导入受体细胞2