文档介绍：临床检验基础第一章血液标本采集和血涂片制备第一节血液标本采集一、病人的准备做血液检验项目检验的病人,一般要求采血前禁食12--14小时,采血的前一天避免吃高脂肪、高蛋白类食物,避免饮酒。否则,会引起血脂及某些血清酶结果升高,甚至血清出现混浊,影响整个检验结果;进行葡萄糖耐量试验的病人,在试验前3天给予适量的碳水化学物饮食,有利于取得正确的结果。二、采血时间血液生化检验一般要求早晨空腹安静时采血。因为体内的各种化学成份受许多因素调节:如饮食后大量葡萄糖及脂类物质吸收入血,使血糖和血脂上升,游离脂肪酸及无机磷降低;运动后会使乳酸、***酸、乳酸脱氢酶、转氨酶、肌酸激酶等升高,血糖降低;昼夜变化大的成份有皮质醇、血清铁、胆红素等;日间变化大的主要是代谢废物成份如尿素、尿酸等;大量饮水可致血液稀释等等。所以,做血液生化检验时应掌握好采血时间。但是,对重症昏迷或急症病例,可随时采血送检糖、钾、钠、钙、血气分析、淀粉酶等项目。但在输液时采血应避免送检项目受输液成份的影响,如输液中补钾、补糖、补碱时送检,对血钾、血糖、二氧化碳结合力等项目均有影响。第二节血液标本采集质量保证第三节血涂片制备与染色一、血液涂片制备1、载玻片的清洁:新载玻片常带有游离碱质,必须用1mol/HCL浸泡24h,清水冲洗,干燥后备用。用过的载玻片可用适量肥皂或其他洗涤剂煮沸20min,趁热刷去血膜,清水冲洗,必要时蒸馏水浸泡,干燥后备用。要保持载玻片的清洁、干燥、中性、无油腻。2、血涂片的制备:有手工推片法、载玻片压拉法、棕黄层图片法等。血涂片可用非抗凝静脉血或毛细血管血,也可用EDTA抗凝血液制备。EDTA抗凝血有时能引起红细胞皱缩和白细胞聚集,因此最好使用非抗凝血制备血涂片。一张良好的血涂片,应厚薄适宜、头体尾分明、细胞分布均匀、血膜边缘整齐,并留有一定空隙。二、血液细胞染色血涂片在用光学显微镜观察前需要固定和染色。固定:将细胞蛋白质和多糖等成分迅速交联凝固,以保持细胞原有形态结构不发生变化。染色:是使细胞的主要结构,如细胞膜、细胞质、细胞核等染上不同的颜色,以便于镜下观察识别。染色方法大多源自罗氏染色法,常用瑞氏染色法、姬姆萨染色法。1、瑞氏染色法:⑴瑞氏染料由酸性染料伊红(E-)和碱性染料亚甲蓝(M+)组成。伊红通常为钠盐,有色部分为阴离子。亚甲蓝(又名美蓝)为四***硫堇染料,通常为***盐,即***化美蓝,有色部分为阳离子。美蓝容易氧化为一、二、三***硫堇等次级染料(即天青)。将适量伊红、美蓝溶解在甲醇中,即为瑞氏染料。甲醇作用:一是溶解美蓝和伊红;二是固定细胞形态。⑵染色原理既有物理的吸附作用,又有化学的亲和作用。⑶pH值的影响细胞各种成分均属蛋白质,由于蛋白质系***电解质,所带电荷随溶液pH而定,在偏酸性环境中正电荷增多,易与伊红结合,红细胞和嗜酸性粒细胞染色偏红,细胞核呈淡蓝色或不染色;在偏碱性环境中负电荷增多,易与美蓝结合,所有细胞呈灰蓝色,颗粒呈深暗,嗜酸性颗粒呈暗褐,甚至棕黑色,中性颗粒偏粗,呈紫黑色。稀释染液必须用缓冲液,冲洗用水应近中性,否则可导致细胞染色反应呈色异常,形态难以识别,甚至错误。⑷染色方法①采血②推片③干燥④标记⑤染色:滴加Ⅰ液3-5滴,使其迅速盖满血涂片,-1min后,滴加等量或稍多的Ⅱ液,轻轻摇动或用吸而球吹气,使染液充分混合⑥冲洗:5-10min后