文档介绍：独创性声明本人郑重声明:所提交的学位论文是本人在导师指导下独立进行研究工作所取得的成果。据我所知,除了特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果。对本人的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中作了明确的说明。本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名: 日期:捌翌:垒!星学位论文使用授权书本学位论文作者完全了解东:lkN范大学有关保留、使用学位论文的规定,即:东北师范大学有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权东北师范大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编本学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名: 日期: 学位论文作者毕业后去向: 工作单位: 通讯地址: 匆指导教师签名:蕴笾吕日期:趁￡垒:笸:庄, 电话:——邮编:——摘要乳酸菌胞外多糖对改善发酵乳制品的理化性质至关重要。它被公认为是食用安全性的天然增稠剂,能显著改善发酵乳制品的粘性、质地和口感等,具有广阔的应用前景。为了进一步了解乳酸菌胞外多糖的结构与功能的关系及更好的调控胞外多糖的生物合成,本研究对一株分离自内蒙古传统发酵乳制品的植物乳杆菌C88胞外多糖进行了分离纯化和结构分析,并对胞外多糖生物合成基因进行了克隆、鉴定和生物信息学分析。研究结果如下: 通过基于负染法的乳酸茵荚膜多糖快速染色镜检技术及改进的荚膜多糖透射电镜分析方法,观察了植物乳杆菌C88产荚膜多糖。通过绘制发酵曲线和多糖含量测定,证明了植物乳杆菌C88为同时产黏液多糖和荚膜多糖的菌株。采用乙醇沉淀、 (Semi—defined medium,SDM)中分离纯化得到一种均一组分的胞外多糖。采用离子色谱和红外光谱法对其单糖组成和结构进行初步分析,结果表明,植物乳杆菌C88胞外多糖主要由半乳糖和葡萄糖两种单糖组成,其物质的量比为l:2。。并对植物乳杆菌C88 胞外多糖进行化学修饰,获得了其硫酸化和磷酸化衍生物。根据已经报道的乳酸菌胞外多糖合成相关基因的保守性和同源性,选择调控胞外多糖生物合成关键酶基因的保守区域,设计PCR引物,扩增了植物乳杆菌C88磷蛋白磷酸酶基因(wzb)和C麟A基因序列。并通过染色体步移的方法,克隆了C麟A上游 ,(C腭B)、磷酸酪氨酸蛋白磷酸酶(CPS4C)、引导糖基转移酶(CPS4E)(galE3)基因序列。使用NCBI blast在线搜索和比对法将该序列与其它已报道乳酸菌胞外多糖生物合成基因簇比较具高度同源性和保守性,并对基因可读框(ORFs)进行了结构和功能的预测分析。关键词:乳酸菌:植物乳杆菌;胞外多糖;生物合成;基因簇 Abstract harides(EPSs)produced by lacticacidbacteria(LAB)play allimportant role in theimprovement ofphysical‘properties offermented davy EPS call be considered asnaturalbiothickenersbecausethey areproduced insituby the LAB—starters that haveGeneral Recognised AsSafestatus(GRAS).The physico-chemical properties ofEPSs determine their viscosifying better understanding of structllre-function relationships ofEPS in adah-y foodmatrix andof EPS biosynthesis remain two major challenges forfurtherapplications thispaper,chemical sn眦tIlre andbiosynthesis genes of EPS fromLactobacillus plantarum C88 were resultswere asfollows: C88 iscapable ofproducing twoforms of EPS whe