文档介绍：植物转化及转基因的检测Date福建省农业遗传工程重点实验室基因工程的概念利用DNA体外重组或PCR扩增技术从某种生物基因组中分离感兴趣的基因,或是用人工合成的方法获取基因,然后经过一系列切割,加工修饰,连接反应形成重组DNA分子,再将其转入适当的受体细胞,※经过酶切消化或PCR扩增等步骤,分离出带有目的基因的DNA片段。DNA重组※将带有目的基因的外源DNA片段连接到能够自我复制的并具有选择标记的载体分子上,形成重组DNA分子。转化※将重组DNA分子转移到适当的受体细胞,并增殖。筛选※从细胞繁殖群体中,筛选出重组子。鉴定※从重组子中,提取DNA,进一步分析鉴定转化子。表达载体构建※将目的基因克隆到表达载体上,使之在新的遗传背景下实现功能表达。Date福建省农业遗传工程重点实验室植物基因工程的主要步骤植物遗传转化※用生物或物理方法将目的基因转入植物受体中转基因植物的鉴定※分子水平、个体水平、群体水平检测目的基因的遗传、表达及其稳定性转基因作物的育种利用※对转基因目的性状和农艺性状的综合评价转基因作物的安全性评价※食品安全性、生态安全性评价和转基因作物安全利用转基因作物的示范推广和应用Date福建省农业遗传工程重点实验室植物的遗传转化方法农杆菌介导法基因枪法电穿孔法PEP法脂质体法花粉管通道法Date福建省农业遗传工程重点实验室几种常用植物基因转化方法的比较转化方法农杆菌法PEG法电击法微针注射法基因枪法花粉管通道法受体材料完整细胞原生质体原生质体原生质体完整细胞卵细胞宿主范围有无无无无有性繁殖植物组培条件简单复杂复杂复杂简单无嵌合体比例有无无无多无操作复杂性简单简单复杂复杂复杂简单设备要求便宜便宜昂贵昂贵昂贵便宜工作效率高低低低高低单子叶植物应用少可行可行可行广泛广泛Date福建省农业遗传工程重点实验室Date福建省农业遗传工程重点实验室水稻(籼稻)根农杆菌转化技术方法愈伤诱导共培养抗性愈伤的筛选与再生成完整植株整个操作过程约需8天第一天(预培养)第三天(划菌)第五天(侵染、共培养)第八天(脱菌、筛选)NB培养基为基本培养基加入相应植物生长调节剂Date福建省农业遗传工程重点实验室Monocotyledonesarenoteasytohandle–callusisverydifficulttobeinitiated,(-)