文档介绍：摘要: 本实验以土壤中的微生物作为原材料, 根据微生物各自的生长特点, 配制不同成分的微生物培养基。将微生物培养物或含有微生物的样品在无菌条件下移植到培养基上培养, 在分离出相应微生物后, 对其进行进一步的纯化, 然后观察其形态特征,并通过微生物的生理生化反应对其种类进行鉴定, 最后研究环境条件对微生物生长的影响。关键字: 培养基,分离,纯化,鉴定,环境条件一、实验材料 1 、分离细菌、真菌、放线菌的材料: 牛肉膏、蛋白胨、***化钠、琼脂、马铃薯、蔗糖;可溶性淀粉、 K2HPO4 、 KNO3 、 MgSO4 · 7H2O 、 FeSO4 · 7H2O 等。新鲜土壤; 培养基: 灭菌的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、淀粉琼脂培养基、马铃薯蔗糖培养基( 10mL 装) ;试剂: 5000U/ mL 链霉素液、 %重铅酸钾液。 2、细菌、真菌、放线菌纯化与鉴定的材料: 菌种:大肠杆菌、枯草杆菌、荧光假单胞菌、金黄色葡萄球菌, 前实验分离的未知菌; 培养基: 淀粉培养基、硫化氢实验培养基、石蕊牛乳培养基、油脂培养基; 试剂: 碘液。菌种: 枯草杆菌斜面; 灵杆菌菌液; 黑曲霉斜面。培养基采用: 牛肉膏蛋白胨斜面培养基牛肉膏蛋白胨琼脂培养基( 10mL )、马铃薯蔗糖培养基( 10mL )、淀粉琼脂培养基( 10mL ); 供试药剂: %碘酒, 75 %酒精, % HgCl 2,5 %石炭酸。二、实验步骤 1 、分离细菌、真菌、放线菌的步骤(一) 、培养基配制 l. 培养基配制的一般方法和步骤(1 )称量:按照培养基配方,正确称取各种原料放于搪瓷杯中。(2 )溶化:在搪瓷杯中加入所需水量(根据实验需要加入蒸馏水或自来水) ,用玻棒搅匀,加热溶解。(3 )调 pH 值(调 pH 也可以在加琼脂后再调) ,用 1N NaOH 或 1N HCl 调 pH ,用 pH 试纸对照。(4) 加琼脂溶化, 在琼脂溶化过程中, 需不断搅拌, 并控制火力不要使培养基溢出或烧焦, 待完全溶化后,补足所失水分,一般数量少,时间短不必补水。(5 )分装:在漏斗架上分装。根据不同的需要进行分装,一般制斜面的装置为管高的 1/5 特别注意不要使培养基粘污在管(瓶)口上以免浸湿棉塞,引起污染。(6) 包扎成捆、挂上标签。培养基分装好后, 塞上棉塞, 用防水纸包扎成捆挂上所配培养基名称的标签。(7) 灭菌备用。灭菌后如需制成斜面的, 应在下磅后取出, 摆成斜面( 见图 6-1 )。培养基经灭菌后,必须放在 37℃恒温培养箱中培养 24h ,如确无菌生长、方可使用。 2 .三种培养基的配方及具体配制方法(1). 牛肉膏蛋白陈琼脂培养基(用于分离和培养细菌,是一种天然培养基)。配方: 牛肉膏 3g 蛋白胨 5g ***化钠 3g 琼脂 20g 自来水 1 000mL ~ 灭菌 / cm2 , 25~30min 本实验将原配方配成各种浓缩液。各种浓度如下: 30 %牛肉膏、 50 %蛋白胨、 30 %***化钠。以配制 200mL 培养基为例。吸取 30 %牛肉膏 2mL ; 50 %蛋白胨 2mL ; 30 %***化钠 2mL ; 加入有刻度的搪瓷烧杯中, 然后用自来水补足到 200mL 。用玻棒搅匀, 在电炉上稍加热,调 pH至 , 加琼脂 4g, 加热熔化, 用玻棒不断搅拌, 至琼脂完全溶解为止, 趁热在漏斗架上装试管,( 见图 6-2)。装带有棉塞的无菌试管, 装置 1/5 的试管高度共 12 支,作斜面培养基、用铝壳试管帽的里装 10mL 。约试管高度的 1/2 以上,用作分离时倒平板用。分装完毕,以 12 支为一捆,用防水纸包扎成捆(图 6-3 ) ,挂上标签,灭菌备用。(2). 马铃薯( 或豆芽汁) 蔗糖( 或葡萄糖) 琼脂培养基( 用于分离和培养真菌之用, 是一种半合成培养基)。配方: 去皮马铃薯(或鲜豆芽) 200g 蔗糖(或葡萄糖) 20g 自来水 1000mL 琼脂 20g pH 天然灭菌(含蔗糖) (含葡萄糖) 30min 制备方法配制 200mL 培养基为例取上皮马铃薯 40g ,切成小块、放入无刻度的搪瓷杯中,加水 200mL ,置电炉上加热煮沸 10min ,用 4 层纱布过滤至具刻度的搪瓷杯中, 滤液加水补足至 200mL 。然后加蔗糖 4g, 加琼脂 4g, 加热熔化并用玻棒不断搅拌直至琼脂完全溶化分装试管,下面一系例步骤同配细菌培养基相同。(3). 淀粉琼脂培养基(高氏一号 Gause ’I) ,用干分离和培养放线菌,是一种合成培养基。配方: 可溶性淀粉 K 2 HPO 4 MgSO 4· 7H 2O