文档介绍：硕士学位论文 U Y2257058 丹参酮IIA抑制瘢痕疙瘩的实验研究硕士研究生:陈刚指导老师:柳大烈摘要一、研究背景瘢痕疙瘩是一种持续生长并超出原皮肽创缘的病理性瘢痕,以成纤维细胞的不断增殖及细胞外基质特别是胶原的过度沉积为特征,被视为人类独有的真皮成纤维细胞肿瘤。瘢痕疙瘩不仅仅影响美观,而且常伴有瘙痒和疼痛感等局部症状,甚至导致局部功能障碍,给患者的生理和精神上都带来了巨大的痛苦。瘢痕疙瘩成纤维细胞与其他正常成纤维细胞相比,其I型胶原及纤维粘连蛋白过度表达以及胶原多肽的降解降低导致细胞外基质过度沉积;VEGF、 TGF—Bl、TGF—B 2等生长因子及PDGF—Q受体等生长因子受体的过度表达,同时瘢痕疙瘩成纤维细胞对生长因子的刺激反应敏感;瘢痕疙瘩成纤维细胞增生及凋亡失衡,瘢痕疙瘩组织中成纤维细胞的凋亡率要明显低于正常皮肽组织中成纤维细胞。这些差异都是引起瘢痕疙瘩形成的重要原因。瘢痕疙瘩是整形科常见疾病,但也是临床工作所面临的治疗难点,现常采用手术切除、激光治疗、类固醇药物注射、硅凝胶治疗、放射治疗、5一氟尿嘧啶注射等治疗方法的综合运用,这些方法取得了一定的疗效,但也存在各自的不足,因此至今尚缺乏瘢痕疙瘩的理想治疗方法。现常用的瘢痕疙瘩治疗方法中,、激光治疗、皮质类固醇激素注射及射线治疗的治疗原理之一即是诱导瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡,抑制其增飧。有研究者提出,现今瘢痕疙瘩治疗效果欠佳也与细胞凋亡有关,一方面是人为诱导凋亡仍然不足,另一方面是可能是诱导凋亡过度,导致其他种摘要类细胞死亡,引发新的修复后,而造成延迟性的增生。可见,寻找瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡缺陷机制以及有效诱导其凋亡对瘢痕疙瘩治疗具有重要意义。近年来,在中药或中药提取物治疗瘢痕疙瘩的研究方面取得了一定的进展。研究指出丹参与黄芪的混合提取物(CASE),抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增贿、侵袭及胶原合成的作用,但CASE具体有效成分并不十分明确。 ,主要成份包括丹参酮(I、II A、IIB)、(I、II)等。其中, ,其标准品稳定易得。 A含有醌型结构,易被氧化还原,可参与机体的多种生化反应而有多种生物活性。近来研究发现,丹参酮II A可诱导多种人类肿瘤细胞的凋亡,可诱导白血病 、人肝癌细胞、人宫颈癌细胞、人乳腺癌细胞以及人结肠癌细胞凋亡的作用。并且有报道指出,兔耳增生性瘢痕模型中, A对兔耳增生性瘢痕有明显的抑制作用:,诱导MMP一9mRNA的表达而促进胶原降解,抑制胆道瘢痕的形成的作用。考虑月·参酮IIA可能对瘢痕疙瘩成纤维细胞也具有同样的抑制增殖,诱导凋亡的作用,可用于瘢痕疙瘩的治疗。由于瘢痕疙瘩是人类所特有的病理性瘢痕,至今尚无理想的瘢痕疙瘩动物模型,因而增加了瘢痕疙瘩的研究难度。现瘢痕疙瘩动物模型的建立主要有以下三种:①在动物身上诱导出类似瘢痕疙瘩的瘢痕增生模型:②将人的瘢痕疙瘩移植于免疫缺陷动物体内;③应用组织工程的原理和方法构建人瘢痕疙瘩动物模型。第一种动物模型的瘢痕增生程度和人体瘢痕差距明显,该模型仍存在很多争论,治疗评价研究所得结果可信度受到影响:第三种应用组织工程的原理和方法构建人瘢痕疙瘩动物模型的方法尚不十分成熟,相关文献报道不多,还需进一步研究探讨,第二种动物模型自1985年,Shetlar首次报道,随后Estrem及 Kischer等人进行了类似的研究,证实了该动物模型的可行性。此后,我国学者 n 硕士学位论文在此基础上也开展了进一步的研究。他们研究发现,裸鼠瘢痕疙瘩模型中移植于裸鼠皮下的瘢痕疙瘩组织能基本保持原有的组织学形态和生物学形念,具有较好的可操作性和可复制性。并且在裸鼠的瘢痕疙瘩模型建立过程中,保酎表皮的裸鼠瘢痕疙瘩模型更能维持瘢痕疙瘩原有的生物学特性。并有研究明确指出,瘢痕疙瘩组织植入后的l~4周是良好的实验干预时机,是一个相对理魅}的瘢痕疙瘩模型。二、研究目的本实验研究是体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞后,给予丹参酮II A干预,并与对照组进行比较,观察体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞细胞增箔,细胞凋亡及细胞周期的变化,探讨丹参酮IIA对体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞细胞的影响。将瘢痕疙瘩组织块植入裸鼠皮下,制作瘢痕疙瘩裸鼠模型,观察该动物模型的可靠性,并于裸鼠腹腔注射丹参酮II A,与对照组进行比较,观察瘢痕疙瘩组织块的大体形念变化,组织学形态变化,特别是细胞凋亡情况。三、方法 :所用瘢痕疙瘩组织均取自上海交通大学附属上海市第九人民医院整形外科的17例瘢痕疙瘩患者。术前患者符合