文档介绍：蛋白质的沉淀反应一、目的和要求 1 、加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识 2 、掌握几种沉淀蛋白质的方法 3 、了解蛋白质变性与沉淀的关系二、沉淀反应(一)原理在水溶液中, 蛋白质分子的表面上由于有水化层和同性电荷的作用, 所以成为稳定的胶体颗粒。但这种稳定的状态是有条件的。在某些理化因素的作用下, 蛋白质分子表面带电性质发生变化、脱水甚至变性, 则会以固态形式从溶液中析出, 这个过程就称为蛋白质的沉淀反应。蛋白质的沉淀反应可分为以下两种类型: 1 、可逆沉淀反应沉淀反应发生后, 蛋白质分子内部结构并没有发生大的或者显著变化。在沉淀因素去除后, 又可恢复其亲水性, 这种沉淀反应就是可逆沉淀反应, 也叫做不变性沉淀反应。属于这类沉淀反应的有盐析作用、等电点沉淀以及在低温下短时间的有机溶剂沉淀法等。 2 、不可逆沉淀反应蛋白质在沉淀的同时, 其空间结构发生大的改变, 许多副键发生断裂, 即使除去沉淀因素, 蛋白质也不会恢复其亲水性, 并丧失生物活性, 这种沉淀反应就是不可逆沉淀反应。重金属盐、生物碱试剂、强酸、强碱、加热、强烈震荡、有机溶剂等都能使蛋白质发生不可逆沉淀反应。(二)盐析 1 、材料与试剂(1)10% 的卵清蛋白溶液( 要求新鲜配制)、浓蛋白溶液(2) 饱和硫酸铵溶液(3) 固体硫酸铵(4 )滤纸、玻棒 2 、操作方法(1 )取试管一支,加入浓蛋白溶液 2ml ,再加等量的饱和硫酸铵溶液,混匀后静置 10 分钟将出现沉淀。此沉淀物为球蛋白。(2 )取上清液于另一支试管。(3 )向上清液液中加入硫酸铵粉末,边加边用玻棒搅拌,直至粉末不再溶解为止。静置数分钟后,沉淀析出的是清蛋白。(4 )向两支试管中分别加水,观察其沉淀是否溶解。(三)重金属盐沉淀重金属离子如 Pb 2+、 Cu 2+、 Hg 2+、 Ag 2+ 等可与蛋白质分子上的羟基结合生成不溶性金属盐而沉淀: PrCOO -NH 3 +OH -PrCOO -NH 2Ag +Pr NH 2COOAg 重金属盐类沉淀蛋白质的反应通常很完全,特别是在碱金属盐类存在时。因此, 生化分析中, 常用重金属盐除去体液中的蛋白质; 临床上用蛋白质解除重金属盐引起的食物中毒。 1 、材料与试剂(1)10% 的卵清蛋白溶液( 2) 氢氧化钠溶液(3)3% ***银溶液(4)% 硫酸铜溶液(6 )试管 3支 2 、操作方法(1 )取试管 2 支,分别编号后各加入 1ml