文档介绍：【中文摘要】:探讨叶酰聚谷氨酸合成酶(FPGS)在氨甲蝶呤(MTX)对映体(L-(+)-MTX和D-(-)–MTX)耐药A549细胞株中的表达,并应用于临床病例。方法:用SYBRGreenI为荧光染料,以β-actin作参照,建立检测FPGSmRNA的实时荧光定量PCR方法;根据循环阈值(Ct值)、标准曲线相关系数、斜率、重复性曲线、熔解曲线、扩增效率曲线等进行方法学评价;并用该方法检测MTX对映体耐药细胞株及应用MTX耐药的白血病骨髓细胞中FPGS基因表达;用蛋白免疫印迹方法测定肺癌A549细胞株和MTX对映体耐药A549细胞株中的FPGS蛋白表达。结果:建立的标准曲线Ct值与模板浓度有良好的线性关系,FPGS和β-,斜率分别为--,批内变异系数(CV)%~%,%,熔解曲线均呈单个特异峰,扩增效率相似();15μmol/L、35μmol/L、55μmol/L各浓度点L-(+)-MTX和D-(-)–MTX两组间FPGSmRNA表达水平差异均有统计学意义(...【英文摘要】:Tostudytheexpressionoffolylpolyglutamatesynthetase(FPGS)inmethotrexateenantiomersresistantA549celllines(L-(+)-MTX和D-(-)–MTX):Areal-timefluorescencequantitativePCRmethodfordetectionofFPGSmRNAwasestablishedusingSYBRGreenIasfluorescenceandβ-(Ct),correlationcoefficient,slope,repeatabilitycurve,...【关键词】叶酰聚谷氨酸合成酶氨甲蝶呤对映体A549细胞耐药性聚合酶链反应【英文关键词】FolylpolyglutamatesynthetaseMethotrexateEnantiomerA549CellLineDrugResistancePolymerasechainreaction【目录】叶酰聚谷氨酸合成酶在氨甲蝶呤对映体耐药A549细胞株中的表达及临床应用英文缩略词表5-6中文摘要6-8英文摘要8-91前言10-112材料与方法11-223结果22-294讨论29-335结论33-34参考文献34-38附录38-39致谢39-40综述40-47参考文献46-47拎涂旅凤庙懈油忽呵篇笛焦埂嘶用