文档介绍：天津医科大学博士学位论文中文摘要目的他莫昔芬作为乳腺癌内分泌治疗的代表药物被广泛用于治疗早期及晚期雌激素受体和\或孕激素受体阳性的乳腺癌患者。它能显著提高乳腺癌患者无复发生存率及总存活率,并能降低对侧乳腺癌的发病率。然而有数据显示,约有 %雌激素受体阳性的乳腺癌患者对他莫昔芬并不敏感。有学者提出,在乳腺癌的内分泌治疗中,除了目前已经明确的靶点外,可能尚存在其他的重要分子与雌激素、孕激素相互作用,共同影响他莫昔芬治疗的效果。,其蛋白参与细胞凋亡,信号转导、细胞增殖及基因转录等多条调节通路。,增强肿瘤细胞对缺氧、辐射、化疗药物等刺激的耐受性,与肿瘤细胞耐药有关。更有研究显示,。,探讨BAG一1在乳腺癌他莫昔芬治疗中的作用,为乳腺癌内分泌治疗敏感人群的筛选及疗效的预测提供新的分子指标。方法 1、, 4-OH TAM的培养液中,建立人乳腺癌他莫昔芬耐药细胞TAMR/。并在不同浓度4-OH TAM作用下,通过MTT测细胞存活率、、流式细胞术测细胞周期等方法检验TAMR/MCF一7细胞的耐药特性; 2、采用real-timePCR和westem ,初步分析其表达水平与乳腺癌细胞对 TAM敏感性的关系,检测两株细胞中ER表达水平的差异,分析耐药细胞中的耐药特性的产生是否与ER表达的丢失相关; 3、,, , 并筛选干扰效果较好的siRNA以及适宜的转染浓度,用于下一步实验; 天津医科大学博士学位论文 4、。通过MTT测细胞存活率、 、流式细胞术测细胞周期等方法检测 ; 5、-1 p50, p46,-1p33分别转染乳腺癌细胞株,,转染48小时后, 。并通过MTT测细胞生长抑制率、、。镗里:口木 1、经过6个月低浓度的他莫昔芬持续诱导,初步建立人乳腺癌他莫昔芬耐药细胞()。倒置显微镜下可观察他莫昔芬耐药细胞() 和敏感细胞(MCF一7)形态学上差异明显;在相同浓度4-OH TAM作用下, TAMR/, TAM 对耐药细胞的增值抑制作用明显弱于其对敏感细胞的作用。 细胞的存活率较低、凋亡比率显著高于TAMR/,。 2、.7中均有表达, 在耐药细胞中的表达水平显著高于其在敏感细胞中的表达。而两株细胞中ERot 的表达水平未见显著变化。 3、与空质粒对照组相比,,筛选其中干扰效率最高的siRNA序列转染TAMR/ 细胞。比较siRNA转染组与空质粒对照组对4-OH TAM的敏感性发现,在4-OH TAM作用下,两株细胞的存活率差异明显,且差异随着药物浓度的增大而增加, 在10 nM、100 nM时,两株细胞的细胞存活率差异最为显著。100nM 4-OHTAM 处理48小时后,BAG—l降表达组与空白对照组细胞凋亡率差异显著。 4、 中,。 MTT及Ann