文档介绍：犬瘟热DNA疫苗的构建及免疫实验的研究摘要犬瘟热病毒(CDV)属于副粘病毒科(family Paramyxoviridae)麻疹病毒属(genus Morbillivirus)成员,为有囊膜的负链线性RNA病毒,自然条件下犬瘟热病毒感染食肉目中犬科、鼬科、浣熊科等多种动物,猫科动物也可感染。是当前对养犬业、毛皮动物养殖业和野生动物保护业危害最大的疾病之一。防治犬瘟热的有效途径是疫苗接种,虽然灭活疫苗和弱毒疫苗在控制犬瘟热发生上起了一定作用,但随着使用的广泛,也发现了许多缺陷,弱毒苗可引起免疫抑制和中枢神经系统的损坏:随着CDV宿主谱同趋扩大,弱毒疫苗的使用还可能致死某些易感动物并带来散毒的危险。此外,CDV本身的变异也可能导致疫病的流行。因此,必须寻找更安全、有效、实用的新型疫苗。基因疫苗和重组活载体疫苗是近年来研究比较热的新型疫苗,在预防免疫方面也取得很大进展。最新研究表明CDV融合蛋白(F)和血凝素(H)蛋白是宿主免疫系统的主要目的抗原,是产生中和抗体的重要抗原之一。核衣壳(N)蛋白是保守性较强的免疫原性蛋白,此外N蛋白上含有T细胞表位。H,F幂I:IN蛋白在犬瘟热的免疫预防方面起重要作用。为了研制新一代安全、高效的CDV基因工程疫苗,本研究根据GeneBank己发表的犬瘟热病毒H、F和N基因序列,设计四对特异引物,经RT—PCR扩增后,连接到pMDl8-T载体,序列测定证明各基因序列正确。然后将各基因亚克隆到真核表达载体pIRESlneo中,构建成四种重组真核表达质粒,经过Western--blot鉴定证明各重组质粒可以表达相应的目的蛋白。之后以构建的真核表达质粒pIRES H、 pIRES F、pIRES NI和plRES N2为基因疫苗,进行了小鼠和貉子的动物免疫试验, 对免疫鼠和貉子体内免疫应答水平进行了ELISA检测,并对貉子进行了攻毒保护实验。结果显示:所构建的基因疫苗可以诱导小鼠和貉子产生特异性免疫应答反应,虽然貉子在经过三次基因免疫后仍不能完全抵抗强度攻击(保护率为33%到 100%不等),但弱毒疫苗也有貉子攻毒后死亡,不能对貉子产生完全的保护。关键词:犬瘟热病毒表达和鉴定貉子 Study on Constructing theDNA ine ofCanine Distemper inationExperiments Abstract The Canine distemper virus which naturally infected Canis、Mustela、Ursidae and cat and belonged tothenumber ofgenus Morbillivirus inParamyxoviridae minor strand RNA virus having one ofthemost acute and highly contagious disease incanine farming,fur cultivation and wildlife conservation. The useful way ofpreventing Caninedistemper ine inoculation,there are lotsof defects ininactivated ine and ine attenuated ine has intrinsic ings despite itsimportant role incontrolling the occurrence ofCD:it can cause immunosuppression and S, may belethalsome susceptible animal and possess a wild , mutation ofCDV Call also cause epidemic safer、more effective and more pragmatic ine being ine ically engineering ine are studied by more andmore people. Many studies have shown thattwoglycoproteins(Hemagglutinin Hand Fusion Fprotein)of CDV aremajor target antigens forthehost immune fN)protein highly conserved immunog