文档介绍：、 实验目的1、 掌握无菌操作在微生物接种过程中的重要性。2、 掌握几种常用的微生物接种方法。3、 掌握微生物微生物扩大繁殖的基本方法。4、 认识微生物接种工具二、 实验原理微生物接种技术是生物科学研究中最基本的操作技术。由于实验目的、培养基种类及容器等不同,所用接种方法不同,如斜面接种、液体接种、固体接种和穿刺接种等,以获得生长良好的纯种微生物。为此,接种必须在一个无杂菌污染的环境中进行严格的无菌操作;同时,因接种方法的不同,常采用不同的接种工具,如接种针、接种环、移液管和玻璃刮铲等。三、 实验器材主要仪器及设备无菌室、超净工作台、培养箱、振荡器、接种针、接种环、接种钩、接种铲,试管固体斜面培养基、培养基平板、三角瓶液体培养基,PDA平板及斜面,牛肉膏■蛋白腺■琼脂平板、斜面培养基、牛肉膏■蛋白腺液体培养基、试管半固体培养基。菌种大肠杆菌(Escherichiacoli)、青霉(Penicilliumsp.)>酿酒酵母(haromycescerevisiaeHansen)>细黄链霉菌(Streptomycesmicroflavus)放线菌等。四、操作步骤(一)斜面接种技术具体操作如下:1、 贴标签接种前在试管上贴上标签,注明菌名、接种日期、接种人姓名等。。2、 点燃酒精灯。3、 接种用接种环将菌种移接到贴好标签的试管斜面上。无菌操作程序简述如下: ⑴手持试管将菌种和用于接种的斜面两支试管用大拇指和其他四指握在左手中、使中指位于两试管之间。斜面向上,并使它们位于水平位置(图a)o⑵旋松棉塞先用右手将棉塞旋松,以便接种时易于拔出。⑶取接种环右手拿接种环在火焰将环端烧红灭菌,然后将有可能伸入试管的其余部分,均用火烧过灭菌。⑷拔棉塞用右手的无名指、小指和手掌边先后拔出试管的棉塞,然后让试管口缓缓过火灭菌(切勿烧得过烫),如图b、c所示。⑸环冷却将灼烧过的接种环仲入菌种管,先使环接触没有长菌的培养基部分,使其冷却。⑹取菌种待环冷却后轻轻沾取少量菌或饱子,然后将接种环移出接种管,如图d所示,注意不要使环的部分碰到管壁,取出后不可使环通过火焰。⑺接种在火焰旁迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管。从斜面培养基的1实验二微生物接种技术底部向上部作“之”字形来回划线,方向是从下部开始,一直划至上部,勿划破培养基(图e)。有时也可用接种针仅在斜面培养基的中央划一条线作斜面接种,以便观察菌种的生长特点。⑻塞棉塞取出接种环,灼烧试管口,并在火焰旁将棉塞塞上。塞棉塞时,不要用试管迎棉塞,以免试管在移动时带入不洁空气,如图f、g所/J\o⑼环灭菌将接接种环,再将棉花塞(二)穿刺接种(1) 取两支新鲜半固体牛肉膏蛋白腺柱状培养基,做好标记(写上菌名)、接种日期,接种人等)。(2) 接种的方法是,用接种针沾取少量待接菌种,然后从柱状培养基的中心穿入其底部(但不要穿透),然后沿原刺入路线抽出接种针,注意接种针不要移动。(3) 接种后30