SDS法提取DNA.doc

文档介绍：SDS法提取DNA植物各个部位都可用作总DNA抽提的材料,常用的材料一般为植物幼叶。其基本原理是:先用机械的方法使组织和细胞破碎,然后加入十二烷基磺酸钠(SDS)等离子型表面活性剂,溶解细胞膜和核膜蛋白,使细胞膜和核膜破裂。再加入酚和***仿等表面活性剂,使蛋白变性。最后加入无水乙醇沉淀DNA;沉淀的DNA,即为植物总DNA,溶于TE溶液中保存备用。三、实验材料、器具及试剂水稻幼叶高速台式离心机,振荡器,水浴箱,,玻璃滴管,移液器,研钵,,2ml离心管,枪头,烧杯,量筒等。无水乙醇,***仿,异戊醇,TE缓冲液(),抽提液(200mMTris-HCl,;250mMNaCl;25mMEDTA;%SDS)四、实验步骤⑴取幼叶5g左右放于研钵中,加入少许石英砂,再加入400μl抽提液,磨成绿色浆状。⑵倒入2ml离心管。约用400μl抽提液洗涤研钵,也倒入离心管,将两次抽提液混匀。⑶置于56℃水浴中5分钟。⑷加入适量***仿,振荡,充分混匀。⑸ 14000rpm离心5分钟。。⑹加入等体积预冷的无水乙醇,轻轻混匀,静置直到DNA析出。⑺ 14000rpm离心2分钟,去上清液。⑻加入70%乙醇漂洗。适当风干,溶于100-200μlTE溶液中待用。五、注意事项:⑴幼叶不宜太多;***仿的量尽可能多些;与***仿混合时充分摇匀,否则蛋白变性不完全。⑵研磨幼叶后匀浆较重要,这直接影响DNA的产量。⑶处理:若第5步上清液较为混浊,则需要重复第4和第5步。