文档介绍：实验三细菌革兰氏染色法及芽孢染色法一、;。二、。。三、实验材料和用具大肠杆菌()、金黄色葡萄球菌(usaureus)菌液,枯草芽抱杆菌(Bacillussubtilis)的斜面菌种。革兰氏染色液(结晶紫染液、卢戈氏碘液、95%乙醇、石炭酸复红液等)、香柏油、二甲苯和5%孔雀绿水溶液。显微镜、擦镜纸、接种环、载玻片、吸水纸、试管、小滴管、酒精灯和烧杯。四、操作步骤(一),用接种环在洁净无脂的载玻片上做一薄而匀、直径约1cm的菌膜。涂菌后将接种环火焰灭菌。。亦可把玻片置于火焰上部略加温加速干燥(温度不宜过高)。,便于染料着色,,通过火焰3次,以热而不烫为宜,防止茵体烧焦、变形。此制片可用于染色。,染1min后,用水洗去剩余染料。,1min后水洗。%乙醇脱色,摇动玻片至紫色不再为乙醇脱退为止(根据涂片之厚薄需时30s至1min水洗。,水洗。,油镜镜检。(二)(1)取37℃培养18-24h的枯草芽孢杆菌作涂片,并干燥,固定(参见“细胞单染色法”)。(2)于载片上滴人3—5滴5%孔雀绿水溶液。(3)用试管夹夹住载玻片在火焰上用微火加热,自载玻片上出现蒸汽时开始计算时间约4-5min。加热过程中切勿使染料蒸干,必要时可添加少许染料。(4)倾去染液,待玻片冷却后,用自来水冲洗至孔雀绿不再褪色为止。(5)%沙黄水溶液(%碱性复红)复染1min,水洗。(6)制片干燥后用油镜观察。芽孢呈绿色,菌体红色。(1)加1-2滴自来水于小试管中,用接种环从斜面上挑取2—3环培养18—24h的枯草芽孢杆菌菌苔于试管中,并充分期匀打散,制成浓稠的菌液。(2)加5%孔雀绿水溶液2—。(3)将此试管浸干沸水浴(烧杯)中,加热15—20min。(4)用接种环从试管底部挑数环菌于洁净的载玻片上,并涂成薄膜,将涂片通过微火3次固定。(5)水洗,至流出的水中无孔雀绿颜色为比。(6)加沙黄水溶液,染2—3min后,倾去染液,不用水洗。(7)干燥后用油镜观察。芽孢绿色,菌体红色。(三)结果革兰氏阳性菌染成蓝紫色,革兰氏阳性菌染成淡红色。(四)检测未知菌用以上方法对未知菌进行革兰氏染色呵芽孢染色,并绘图、记录染色结果。五、。,不可使染液干涸。,过长,则脱色过度,会使阳性菌被染成阴性菌。,会使阳性菌被染成阴性菌,故不能选用。,使大部分芽泡仍保留在菌体上为宜。六、、涂片及涂片的固定;。七、实验报告(一)绘图大肠杆菌革兰氏染色视野图;金黄色葡萄球菌革兰氏染色视野图;枯草芽孢杆菌及巨大芽孢杆菌的菌体及芽孢形态,芽孢的着生位置。(二)记录革兰氏染色法步骤,