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甘露聚糖酶的测定方法.doc

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甘露聚糖酶的测定方法.doc

上传人:bb21547 2020/6/7 文件大小:19 KB

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甘露聚糖酶的测定方法.doc

文档介绍

文档介绍:-半乳甘露聚糖进行水解,用DNS试剂(3,5-二硝基水杨酸)分光光度法测定水解所产生的还原糖量。(MNU)被定义为:在测定条件下,1秒钟内从甘露聚糖中产生1nmoL相应还原糖-甘露糖所需的酶量(1MNU=1nkat)。(Trichoderma)的甘露聚糖酶样品的测定。当检测其它来源的酶活时,本测定方法的直线性需要校正。本测定方法中的DNS试剂在吸入后,接触皮肤和眼睛,或被误服后,对人体有害。。(,)(C6H8O7·H2O)于800mL水中,(消耗约110mL),再用水定容至1000mL。-%(SigmaG-0753),溶于约80℃的柠檬酸缓冲液中,磁力搅拌,加热至沸腾,继续搅拌冷却至室温,加盖缓慢搅拌过夜。将不溶的沉淀物离心(1000rpm离心10min),并用柠檬酸缓冲液定容至200mL。将此底物溶液在-20℃下冰冻保存。临用前,将底物溶液在沸水浴中缓慢溶解至80℃左右后使用。,5-二硝基水杨酸(SigmaD-0550)于4000mL水中,不断磁力搅拌,,使之完全溶解,再继续磁力搅拌,分数次少量加入1500g四水合酒石酸钾钠,并小心加热,溶液最高温度不超过45℃。冷却至室温后定容至5000mL。如果溶液不澄清,用Wheatman1号滤纸过滤,然后室温保存于棕色瓶中。℃恒温水浴锅100℃℃±℃。~。,置50℃水浴中保温5min。在其中一支试管中加入200μL稀释酶样,磁力旋转搅拌均匀,置于50℃水浴中准确保温5min。,搅拌均匀。在另一支试管(空白管)中加入200μL稀释酶样,同时将两支试管放入沸水浴中准确保温5min,取出置入冷水中冷却至室温。于540nm处测量酶样对空白的吸光度,在酶活标准曲线上读取酶活,再乘以酶样稀释倍数。。将360mg甘露糖[1](SigmaM-6020)溶解于柠檬酸缓冲液中,并用缓冲液定容至100mL。(葡萄糖标准品应置于干燥器内保存