快速连接缓冲液(Quick Ligation Buffer).pdf

文档介绍：ShineGene Molecular Biotech,Inc.
上海闪晶分子生物科技有限公司
2х快速连接缓冲液

描述:本试剂可在室温(22℃) 10 分钟条件下,迅速完成 DNA 片段粘端或平滑端连接反应。可用于
DNA 片段克隆,文库构建,TA 克隆,Linker 连接等。
组成: 50 次()
.:SGB001 2х快速连接缓冲液 1000ul
价格: 元
储存:收到后-20℃保存,避免反复冻融。
快速连接反应:
1. 建立反应体系如下:
2 × Rapid Ligation Buffer 10ul
Vector DNA (50~100 ng) Xul
Insert DNA (~3 molar ratio of Vector DNA) Yul
T4 DNA ligase 1ul
ddH2O Zul
Total volume 20ul
2. 充分混匀,瞬时离心将液体甩到管底。
3. 室温(22℃)反应 10 分钟。延长时间并不明显增加连接效果。
4. 可直接转化感受态细菌,或-20℃冻存。
5. 取 2-5µl 冷却的快速连接混合物,加入自制或购买的感受态细胞,混匀。根据所用菌株和感
受态细菌制备方法,选用相匹配的方法进行转化。
说明:
1. 在 20µl 反应体系内载体 DNA 约为 50-100 ng。插入 DNA 片段的量约为载体片段的 3-6 倍摩
尔量。总的载体和插入片段 DNA 浓度应在 1-10 ng/µl 之间。过多的 DNA 常常会增加阴性克隆本
底。如不能确定 DNA 片段浓度,可以不同的比例做几个连接反应。
2. 转化前不要热灭活连接酶,否则将降低转化效率。
3. 转化时加入<5µl 的快速连接反应物,否则将降低转化效率。
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4. DNA 片段体积大于 10 µl 的,可相应增加 2× Rapid Ligat