文档介绍：山东农业大学
硕士学位论文
不同途径免疫NDV弱毒苗诱导鸡体黏膜和系统免疫反应的研究
姓名:闫振贵
申请学位级别:硕士
专业:预防兽医学
指导教师:朱瑞良
2011-06-05
山东农业大学博士学位论文
中文摘要
鸡新城疫(Newcastle disease,ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)
引起的一种急性、败血性、高度接触性传染病,是危害世界养禽业的最重要传染病之一。
目前,预防 ND 虽然有多种有效疫苗,但由于免疫途径和免疫方法不当等原因,致使鸡
群发生 ND 的现象不断发生,对养鸡业的健康发展造成了很大的损失。一般认为系统免
疫在鸡抵抗 NDV 的感染中发挥主要作用,但在生产实践中却存在着鸡体血清抗体水平
高仍然发病的现象,原因何在?有待探索。黏膜免疫是鸡体免疫系统产生免疫应答的重
要组成部分,对鸡体的局部免疫及全身免疫发挥着重要作用。长期以来,关于 NDV 弱
毒疫苗免疫的研究主要集中于全身系统免疫,而对特异性黏膜免疫的发生规律的研究较
少,难以全面揭示 NDV 弱毒疫苗的免疫保护机理。因此,本研究对 NDV 弱毒苗经不
同黏膜途径免疫雏鸡后呼吸道和消化道等局部黏膜特异性抗体和抗体阳性细胞的的发
生规律进行了全面系统的研究,主要试验结果如下:
1. 鸡 SIgA 的纯化及其抗病毒活性
首先应用硫酸铵盐析和聚乙二醇(PEG)沉淀粗提鸡胆汁中的分泌型IgA(SIgA),
再经Sephadex G-200 凝胶过滤和DEAE纤维素离子交换层析纯化SIgA,并用SDS-PAGE
电泳和琼脂扩散试验检测其纯度和活性,然后采用鸡胚接种试验、鸡胚病毒中和试验和
攻毒治疗试验,检测鸡SIgA的抗NDV活性,结果表明,,
重链分子量约为67kD,轻链分子量约为28kD;SIgA处理NDV后,能明显降低鸡胚尿囊
液中NDV的血凝效价,与血清组差异不显著(P>);,
低于免疫血清;另外,用纯化的SIgA治疗攻毒的SPF鸡,%,同样与血
清治疗组差异不显著(P>);试验结果证明鸡SIgA具有一定的中和NDV的能力。
2. 不同途径免疫 NDV 弱毒苗诱导鸡体黏膜和系统免疫发生规律的研究
通过建立了检测 NDV 特异性抗体的间接 ELISA 方法, 对 7 日龄 SPF 鸡经不同途径
免疫 NDV 弱毒苗后的血清、胆汁、呼吸道和消化道分泌液中 NDV 特异性 SIgA、IgG
和 IgM 的消长规律进行了检测,同时检测了血清 HI 抗体滴度。结果表明,点眼滴鼻免
疫和饮水免疫鸡的血清、胆汁、呼吸道和消化道分泌液中均可检测到 NDV 特异性 SIgA、
IgG 和 IgM,其中:IgM 在所有样品中检出时间最早,大部分于免疫后第 3d 检测到,并
于第 7d 达到高峰后迅速下降,是鸡体早期抵抗 NDV 感染的主要抗体;IgG 大部分于免
疫后第 7d 检测到,并于第 21d 达到高峰,是血清的优势抗体;SIgA 大部分于免疫后第
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不同途径免疫 NDV 弱毒苗诱导鸡体黏膜和系统免疫反应的研究
7d 检测到,并于第 28d 达到高峰,在胆汁、呼吸道和消化道分泌液中抗体水平最高,且
维持时间最长,是 NDV 弱毒苗诱导鸡胆汁、呼吸道和消化道分泌液中抗 NDV 的主要
抗体。各组免疫鸡不仅在诱导部位黏膜分泌液中产生高水平的特异性 SIgA、IgG 和 IgM,
而且在远端黏膜也产生抗体,表明鸡的黏膜免疫类似哺乳动物,也具有共同黏膜免疫的
特点。点眼滴鼻免疫诱导的血清 HI 抗体滴度和特异性 SIgA、IgG 和 IgM 抗体水平显著
高于饮水免疫,表明点眼滴鼻免疫诱导的系统体液免疫强于饮水免疫。点眼滴鼻免疫在
气管洗液和肺洗液诱导产生的特异性 SIgA 水平显著高于饮水免疫,而饮水免疫在消化
道洗液中诱导的特异性 SIgA 水平又显著高于点眼滴鼻免疫,表明不同免疫途径在各黏
膜效应位点诱导的黏膜免疫反应的强度不同,点眼滴鼻免疫在呼吸道引起的黏膜免疫要
强于饮水免疫,而饮水免疫在消化道的免疫强度要高于点眼滴鼻免疫。
NDV 弱毒苗诱导鸡体黏膜和免疫器官中 IgA、IgM 和 IgG 阳性细胞
变化规律的研究
采用常规石蜡切片技术,优化了各种反应条件,建立了检测免疫器官和局部黏膜
IgA、IgM 和 IgG 阳性细胞的间接免疫过氧化物酶组织化学染色法。应用该法,对 7 日