基因敲除技术.ppt

文档介绍：:基因敲除或基因剔除英文名称:geneknock-out;geneknockout定义1:将细胞基因组中某基因去除或使基因失去活性的技术。去除原核生物细胞、真核生物的生殖细胞、体细胞或干细胞基因组中的基因等。广义的基因敲除包括某个或某些基因的完全敲除、部分敲除、基因调控序列的敲除以及成段基因组序列的敲除。所属学科:生物化学与分子生物学(一级学科);方法与技术(二级学科)定义2:将细胞基因组中某基因去除或使基因失去活性的方法。敲除的基因用以观察生物或细胞的表型变化,是研究基因功能的重要手段。所属学科:细胞生物学(一级学科);细胞生物学技术(二级学科)定义3:在基因组水平上改变或破坏靶基因的结构,使其功能完全丧失的实验技术。所属学科:遗传学(一级学科);发育遗传学(二级学科).基因敲除简介定义:通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。,用设计的同源片段替代靶基因片段,从而达到基因敲除的目的。随着基因敲除技术的发展,除了同源重组外,新的原理和技术也逐渐被应用,比较成功的有基因的插入突变和RNAi,它们同样可以达到基因敲除的目的。.(以小鼠为例),成为重组载体。.:现在基因敲除一般采用是胚胎干细胞,最常用的是鼠,而兔,猪,鸡等的胚胎干细胞也有使用。:将重组载体通过一定的方式导入同源的胚胎干细胞(EScell)中,使外源DNA与胚胎干细胞基因组中相应部分发生同源重组,将重组载体中的DNA序列整合到内源基因组中,:目前常用的方法是正负筛选法(PNS法),标记基因的特异位点表达法以及PCR法。其中应用最多的是PNS法。:通过观察嵌和体小鼠的生物学形状的变化进而了解目的基因变化前后对小鼠的生物学形状的改变,达到研究目的基因的目的。.