荧光PCR－HBV检测试剂盒（实时法）.pdf

文档介绍：荧光 PCR 乙型肝炎病毒定量诊断试剂盒
PCR-Fluorescence Quantity Diagnostic Kit for Hepatitis B Virus
使用说明书
【前言】
本试剂盒采用聚合酶链式反应(PCR)结合 Taqman 荧光探针技术,对血清中的乙型肝
炎病毒(Hepatitis B Virus)的特异性 DNA 核酸片段进行定量的检测,本品对 HBV 的检测
灵敏度为 500copy/ml(供研究使用)。
【规格】 20 人份,-20℃保存,有效期 6 个月
【试剂盒组成】
1 核酸提取液 600ul 5 阴性对照(HBV) 10ul
6 HBV定量阳性对照 1 10ul
号 ×106copy/ml
3 HBVPCR 反应液 480μ 7 HBV定量阳性对照 2 10ul
l 号 ×105copy/ml
4 混合酶 40μl 8 HBV定量阳性对照 3 10ul
号 ×104copy/ml
【适用仪器】
本试剂盒适用于 PE5700、7700、LightCycler、FTC-2000 等荧光 PCR 仪。
【标本处理和加样】
血清标本各取 30μl(冻存血清使用前在室温融解,振荡混匀 10 秒钟),加入 30ul 核酸提取
液, 振荡混匀 10 秒种,100℃沸水浴 10 分钟,然后 12,000rpm 离心 5 分钟,最后取上清作 PCR 扩
增。处理后的样品应在 1 小时内使用,或在-20℃~-80℃最长保存 1 个月(不宜反复冻融)。注:
定量阳性对照、阴性对照不要处理,可直接使用。
【试剂准备】
按样品数(样品数=血清标本数+对照品数+定量阳性对照 3 个)n 取 HBV PCR 反应液 n
×24ul、混合酶 n×2ul 混于一离心管中,旋涡振荡器上振荡混匀 10 秒,按每管 26ul 分装于反
应管中。将上述处理好的标本上清液和定量阳性对照 1 至 3 号(务必振荡混匀数秒)各取 4ul
分别加入反应管中,混匀,低速离心数秒,立即进行 PCR 扩增反应。
【PCR 扩增】
PE5700、7700、icycler、FTC2000 荧光仪的程序设置先在 37℃反应 2 分钟,然后 93℃保温 5
分钟,再按 93℃30 秒→60℃60 秒循环 40 次。
lightcycler 荧光仪的程序设置
1
热线电话:[phone] 8009881995 E-mail:******@.cn 网址:
反应管置于 LightCycler 自动荧光 PCR 仪上,37℃反应 2 分钟,93℃2 分钟,再按 93℃5
秒→60℃30 秒循环 40 次,每个循环的升降温速率为 20℃/S,每个循环在 60℃30 秒处进行荧
光检测设置。
【结果分析与判断】
1、基线设定
PE5700、7700、FTC2000:
分析前把参比荧光定为TAMRA,如果没有Ct<16 的强阳性标本,就选 3-15 个循环的平均荧光
信号为基线分析;如果有Ct<16 的强阳性标本,就将此标本定为HBV DNA>1010 copy/ml,并将此
样品从数据库中剔除,再以 3-15 个循环的