文档介绍：荧光 PCR 乙型肝炎病毒定量诊断试剂盒
PCR-Fluorescence Quantity Diagnostic Kit for Hepatitis B Virus
使用说明书
【前言】
本试剂盒采用聚合酶链式反应(PCR)结合 Taqman 荧光探针技术,对血清中的乙型肝
炎病毒(Hepatitis B Virus)的特异性 DNA 核酸片段进行定量的检测,本品对 HBV 的检测
灵敏度为 500copy/ml(供研究使用)。
【规格】 20 人份,-20℃保存,有效期 6 个月
【试剂盒组成】
1 核酸提取液 600ul 5 阴性对照(HBV) 10ul
6 HBV 定量阳性对照 1 10ul
号 ×106copy/ml
3 HBVPCR 反应液 480μ 7 HBV 定量阳性对照 2 10ul
l 号 ×105copy/ml
4 混合酶 40μl 8 HBV 定量阳性对照 3 10ul
号 ×104copy/ml
【适用仪器】
本试剂盒适用于 FX990、DA620、FS1000 等基于 Taqman 技术原理设计的终点法荧光检
测仪及相应软件。
【标本处理和加样】
血清标本各取 30μl(冻存血清使用前在室温融解,振荡混匀 10 秒钟),加入 30ul 核酸提取
液, 振荡混匀 10 秒种,100℃沸水浴 10 分钟,然后 12,000rpm 离心 5 分钟,最后取上清作 PCR 扩
增。处理后的样品应在 1 小时内使用,或在-20℃~-80℃最长保存 1 个月(不宜反复冻融)。注:
定量阳性对照、阴性对照不要处理,可直接使用。
【试剂准备】
按样品数(样品数=血清标本数+对照品数+定量阳性对照 3 个)n 取 HBV PCR 反应液 n
×24ul、混合酶 n×2ul 混于一离心管中,旋涡振荡器上振荡混匀 10 秒,按每管 26ul 分装于反
应管中。将上述处理好的标本上清液和定量阳性对照 1 至 3 号(务必振荡混匀数秒)各取 4ul
分别加入反应管中,混匀,低速离心数秒,立即进行 PCR 扩增反应。
【PCR 扩增】
先 37℃2 分钟,93℃保温 5 分钟,然后再 93℃30 秒→60℃90 秒循环 40 次,最后 4℃保温
或者反应结束后室温平衡 20 分钟。
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