荧光定量PCR-HPV检测试剂.pdf

文档介绍：人乳头瘤病毒(HPV)6,11 荧光定量 PCR 检测试剂盒

【前言】
本品采用聚合酶链式反应(PCR)结合 Taqman 荧光探针技术,对皮肤及粘膜上皮组织中的人乳头瘤
病毒(Human papillomavirus)6,11 型的特异性 DNA 核酸片段进行检测,从而判断人乳头瘤病毒 6,11 型核酸
的存在。试剂盒中使用 dUTP 和 UNG 酶防止扩增产物的污染。
【规格】
32 人份
【试剂盒组成】
1 HPV PCR 缓冲液 600μl 7 HPV 阳性校准品 1 号 30μl
2 Taq 酶 64μl 2×106copy/ml
3 DNA 提取液 2× 8 HPV 阳性校准品 2 号 30μl
5
4 MgCl2 100μl 2×10 copy/ml
5 HPV 荧光探针 100μl 9 HPV 阳性校准品 3 号 30μl
6 阴性对照 100μl 2×104copy/ml
【适用仪器】
本试剂盒在样本处理时应使用符合生物安全规范的负压操作台,适用于 LightCycler、Rotor-Gene、
PE-5700 等基于 Taqman 技术原理设计的自动荧光 PCR 仪及相应软件。
【标本采集和处理】
尿道、***、宫颈分泌物:分泌物棉拭子放入有 1ml 注射用生理盐水的 离心管中,充分洗涤后挤干,
弃去棉球,将浸出液 12,000rpm 离心 15 分钟,弃上清。在沉淀中加入 50ulDNA 提取液,吹打均匀后 100℃沸水浴
15 分钟,12,000rpm 离心 10 分钟。
【试剂准备、加样和 PCR 扩增】
1、试剂准备:按样品数n 取 HPV PCR缓冲液(n+1)×18ul、MgCl2 (n+1)×3ul、HPV荧光探针(n+1)×3ul、Taq
酶(n+1)×2ul混于一离心管中,旋涡振荡器上振荡混匀 10 秒,低速离心数秒,按每管 26ul分装。
2、加样:将样品处理上清液(冻存样品使用前室温充分融化,振荡混匀数秒,13,000rpm 离心 2 分钟)和定量
校准品(使用前应先离心,再充分振荡混匀)1-3 号各 4ul 分别加入反应管中,混匀后置于自动荧光 PCR
仪上,立即进行 PCR 扩增反应。(LightCycler 仪器:反应液配好后,分别取 20ul 移入专用毛细管中,低速离
心数秒后置入 LightCycler-注意事项 8。)
LightCycler PE-5700 Rotor-Gene
步骤温时间循环步骤温时间循环步骤温时间循环数
度度数度
数
预反 50 1min 1 预反 50 1min 1 预反 50 1min 1
应℃应℃应℃
预变 94 2min 1 预变 94 2min 1 预变 94 2min 1
性℃性℃性℃
变性 94 5sec 变性 94 10sec 变性 94 10sec
℃℃℃
40 40 40
延伸 60 30sec 延伸 60 50sec 延伸 60 50sec
℃℃℃
*升降温速率为 5℃/sec *对应信号通道输出值(Gain)定为 5
*在 60℃时采集荧光信号,采集*在