文档介绍：南华大学
硕士学位论文
ADFMChR抑制人肝癌细胞增殖和诱导凋亡作用的研究
姓名:王宇
申请学位级别:硕士
专业:病理与病理生理学
指导教师:周秀田
20070501
原创性声明

本人声明,所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作
及取得的研究成果。尽我所知,除了论文中特别加以标注和致谢的地方
外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获
得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的
同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。

作者签名: 日期: 年月日

关于学位论文使用授权说明

本人同意南华大学有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权
保留学位论文,允许学位论文被查阅和借阅;学校可以公布学位论文的
全部或部分内容,可以采用复印、缩印或其它手段保留学位论文;学校
可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。

作者签名: 导师签名: 日期: 年月日
5-烯丙基-7-二氟亚甲基白杨素抑制人肝癌
细胞增殖和诱导凋亡作用的研究

研究生: 王宇
指导教师: 周秀田教授

中文摘要

目的: 观察白杨素(Chrysin) 衍生物 5- 烯丙基-7- 二氟亚甲基白杨素
(5-ally-7-gen-difluormethylenechrysin, ADFMChR) 诱导体外培养人肝癌细胞系
SMMC-7721 细胞增殖抑制和凋亡作用,探索 ADFMChR 诱导 SMMC-7721 细胞凋
亡的分子机制是否涉及 PPARγ活化途径。
方法: 采用平皿克隆形成法测定 ADFMChR 对人肝癌(SMMC-7721)细胞和人胚肝
(L-02)细胞锚定依赖性生长的影响。细胞计数法检测 ADFMChR 抑制 SMMC-7721
细胞生长作用。吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)染色荧光显微镜观察凋亡细胞形态,计算凋
亡率。PI 染色流式细胞术(FCM)定量分析 ADFMChR 诱导人肝癌细胞(SMMC-7721)
细胞周期阻滞和凋亡程度。应用 Western Blot 分析 ADFMChR 对人肝癌(SMMC-7721)
细胞 PPARγ、NF-κB、Bcl-2、Bax 和 Caspase-3 蛋白表达的影响。
结果:平皿克隆形成法检测表明:ADFMChR 抑制人肝癌(SMMC- 7721)细胞生长,
呈浓度依赖性。其 IC50 值为。ADFMChR 对 L-02 细胞生长抑制的 IC50 值为
,其对人肝癌细胞毒性的选择指数(SI)为。先导物 ChR 对 SMMC-
7721 细胞 IC50 值为 ,ADFMChR 抑制 SMMC-7721 细胞生长作用效价强度
是先导化合物 CHR 的倍。细胞计数结果显示 ADFMChR 降低 SMMC-7721 细胞
存活率,且呈浓度依赖性;常规培养的 SMMC-7721 细胞群体倍增时间为小
时, ADFMChR()可使其延长至小时。 AO/EB 染色荧光显微镜观
察发现: 孵育 48h 后,SMMC-7721 细胞出现典型的细胞凋亡形
态学改变即细胞核固缩、核碎裂和凋亡小体形成。ADFMChR(、)
3
分别处理 48h,细胞凋亡率依次升高。PI 染色 FCM 分析显示: µM、µM 和
µM 的 ADFMChR 处理 48h 后,SMMC-7721 细胞 G1 期细胞分别为 %、
%、%; µM 的 ADFMChR 分别处理 12h、24h、48h、72h),G1 期细胞
分别是 %、%、%、%,较培养基对照组 G1 期细胞百分率(%)
高(P < VS control)。Western Blot 分析证实:随着 ADFMChR 浓度升高和作
用时间延长,SMMC-7721 细胞 NF-κB 和 Bcl-2 蛋白表达逐渐下调, PPARγ、Bax、
Caspase-3 蛋白表达上调。
结论:ADFMChR 诱导人肝癌(SMMC-7721)细胞生长抑制和凋亡,其作用具有相对
选择性,且强于先导物 ChR,其作用分子机制与其活化 PPARγ,抑制 NF-κB 活
性,提高 Bax/ Bcl-2 比值,激活 Caspase-3 有关。

关键词: 肝癌 5—烯丙基—7—二氟亚甲基白杨素凋亡治疗作用