文档介绍：一次性使用无菌注射器用活塞细胞毒性与溶血试验的探讨一次性使用无菌注射器用活塞细胞毒性与溶血试验的探讨摘耍:应用体外细胞毒性试验和溶血试验检测并分析完整的注射器用活塞与被剪碎后的活塞之间结果的差异,探讨不同的样品处理方法对结果造成的影响。用MTT比色法检测体外细胞毒性时,剪碎组的细胞增殖度明显降低。溶血试验中,剪碎组的溶血率显著升高。由于样品的制备方法直接影响到试验体系屮含有溶出物的种类和数量,建议进一步完善并明确注射器用活塞产品的检测方法。 【关键词】一次性使用无菌注射器用活塞;细胞毒性试验;溶血试验屮图分类号:TH446文献标识码:A 一次性使用无菌注射器用活塞属于体外与体内相接触中间接与血液接触类器件,作用时间为八类«24h)[l]o目前,我国用于生产注射器用活塞的主耍原材料为天然橡胶和异戊二烯胶。天然橡胶中含有多种致敏蛋白,易引起致敏反应,所以,以合成橡胶为原材料的注射器用活塞应运而生,如异戊二烯胶。然而,原 材料选择不当或存在生产工艺问题,便会造成注射器用活塞较大的毒性。细胞毒 性试验是一类在离体状态下模拟生物体生长环境,检测医疗器械和材料接触机体组织后生物学反应的体外试验。它是医疗器械生物学评价体系中最重要的检测指标之一,也是几乎所有用途的医疗器械或材料临床应用前的必选项目o这个试验的目的是评价医疗器械和材料致细胞毒性反应的潜在性,并预测最终生物体应用时的组织细胞反应[2]。溶血试验是医疗器械血液相容性评价试验中一项较为基础的试验,其主要原理为将医疗器械与血液直接接触,通过测定红细胞释放的血红蛋白量以判定供试品的体外溶血程度[3]。由丁体外试验较在体试验稳定、快捷、准确度高,故本研究主耍通过体外细胞毒性试验及溶血试验来研究不同的处理方式对注射器用活塞体外毒性的影响。 一、材料与方法 1・1试验样品选用三个厂家生产的一次性使用无菌注射器用活塞,其屮两批次原材料为天然橡胶,一批次的原材料为异戊二烯胶。 ,购自中国科学院上海细胞所。主要药品与试剂:RPMI1640培养液(GIBCO,USA),胎牛血清(杭州四季青生物工程公司),MTT(AMRESCO,USA),DMSO(AMRESCO,USA)。主要仪器:倒置显微镜(Zeiss,型号:Axiovert200),酶标仪(BIO-TEK,型号:ELX800UV),紫外可见分光光度计(北京普析,型号:Tu-1901)o :四呼盐(MTT)比色法取3个厂家注射器用活塞样品,分为完整组和剪碎组,%胎牛血清的RPMI1640培养液并置于37°C放置24h制备浸提液。取高密度聚乙烯浸提液作为阴性对照品;5%的DMSO溶液作为阳性对照。将培养至近汇合的L-929细胞消化,稀释为1X104U/mL,接种于96孔培养板中,每孔加入100uLo在37°C、5%C02培养箱中培养24h,待细胞贴壁后将每孔中原培养液吸除,空白对照组加新鲜培养液200HL,各组加200UL不同样晶组的浸提液以及阴性和阳性对照样品浸提液,置C02培养箱中继续培养。于更换培养液后的72h将培养板取出,置倒置显微镜下观察细胞形态。并毎孔加入20uL质量浓度为5g/L的MTT溶液,继续培养4h后弃去孔