文档介绍：山东农业大学硕十学位论文中文摘要主要组织相容性复合体(Major plex,MHC)是脊椎动物中编码免疫球蛋白样受体的基因家族,常呈现出高度的遗传多样性,与动物的抗病性和生长发育等重要经济性状密切相关。本研究以我国重要的养殖鱼类尼罗罗非鱼为实验材料,采用PCR、同源克隆、RACE、,对MHC家族I A、IIA和IIB 3个基因进行了克隆、表达与多态性分析。主要研究结果如下: (1)获得尼罗罗非鱼MHC A基因eDNA的3’端序列,MHC IIA、MHC IIB基因的eDNA全序列:获得的MHC IA基因eDNA 3’端序列长957bp,含666bp的CDS和 291bp的3’.UTR区,其中3'-UTR区具有真核生物共有的加尾信号从TAAA和29bp的 PolyA尾巴,其编码的221个氨基酸包含了部分的多肽结合区、全部的IGC区以及跨膜区和胞质区:MHC IIA基因eDNA序列全长1205bp(*0101,Genebank登录号: JF719813),开放阅读框长720bp,编码的蛋白质分子包含1个信号肽、2个胞外结构域(a-I )、1个跨膜区和1个胞质区,存在4个保守的半胱氨酸残基以及丰富的磷酸化位点,与其他物种的相似性在23%.65%之间;MHC IIB基因eDNA序列全长1143bp (*0101,Genebank登录号:JF713026),包含35bp的5'-UTR、756bp的开放阅读框和352bp的3'-UTR,编码的蛋白质分子包含1个信号肽、2个胞外结构域(p·l和p一2)、 1个跨膜区和1个胞质区,存在丰富的磷酸化位点,与其他物种的相似性在27%到70% 之间。(2)获得了MHC IIA及MHC IIB基因组DNA序列:MHC IIA基因组序列长 1388bp,含4个外显子和3个内含子,外显子l编码信号肽区,, ,外显子4编码跨膜区及胞质区;MHC IIB基因组序列长2428bp, 含6个外显子和5个内含子,外显子l编码信号肽区,,外显子3和4 ,外显子5和6编码连接肽、跨膜区以及胞质区。(3)MHCIIA及MHCIIB分子均由多个基因位点编码,等位基因间均存在丰富的多态性,且变异主要集中在多肽结合区:从4尾健康的尼罗罗非鱼肝脏eDNA中共得到 8个MHC IIA序列,,其中从1个个体获得4条不同的eDNA序列,这预示着尼罗罗非鱼MHC IIA基因至少存在2个基因座位;从5尾尼罗罗非鱼中获得10个MHC IIB序列且等位基因序列间存在丰富的变异, 尼罗罗非鱼MHC基因的克隆、,其中从同一个体获得5条不同的cDNA序列,预示着尼罗罗非鱼MHCIIB中至少有3个基因座位。(4)RT-PCR分析结果显示,递呈外源性抗原的MHC IIA及MHC IIB基因在健康尼罗罗非鱼的脑、心、脾、肝、头肾、肠、肌肉、鳍、胸腺、性腺、鳃和胃12个组织中均有表达,但是表达量有所差异,体现了其表达与功能的适应性:MHC IIA基因在脾、肾、肠、鳃、性腺、肝、心脏组织中表达量很高,在鳔和肌肉中表达量最低;MHC II B 基因在脾、肾、鳃和肠中表达量最高,性腺、肝、心脏、脑、鳍、胃中表达程度中等, 在鳔和肌肉组织中表达量最低。(5)人工感染嗜水气单胞菌,应用RT-PCR半定量技术,检测了感染后不同时期尼罗罗非鱼5个组织(肝、脾、肾、鳃、肠)中MHC IIA及MHC IIB基因mRNA表达水平的变化。结果显示,5个组织中MHCIIA及MHCIIB基因的mRNA水平均发生了不同程度的变化,提示MHCIIA及MHCIIB作为重要的免疫因子,在清除病原的免疫反应中起着重要作用,可以考虑将其做为检测机体抗病力水平的一种指标。(6)分别根据MHC IA、IIA和IIB这3个基因氨基酸序列的IGC区构建了脊椎动物的系统进化树,结果表明其拓扑结构基本一致,说明这3个分子的IGC区序列可以作为研究鱼类种间进化关系的分子标记。关键词:尼罗罗非鱼;MHC基因;克隆;表达;多态性山东农业大学硕士学位论文 ABSTRACT Major plex(MHC)is ahighlypolymorphic genomie region、Ⅳitll allimportant roleintheimmune system research studiedthecloning, polymorphism,and theexpression plex(MHC)by PCR, homology cloning,RACE an