文档介绍：乙型肝炎病毒表面抗原检测( ELISA ) 1 原理: 在微孔板上预包被被纯化的乙肝表面抗体( HBsAb ), 配以酶标记抗体( HbsAb-HRP )及 TMB 等其它试剂, 采用夹心法原理检测人血清(或血浆)中乙肝表面抗原( HBsAg )。 2 试剂: 试剂名称:乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒(酶联免疫法) 试剂生产厂家:英科新创(厦门)科技有限公司 包装规格: 96Test/Kit 试剂盒组成: HbsAb 预包被微孔板(包被 HbsAb ), HbsA g 酶标抗体(含 HRP 标记 HbsAb ), HbsAg 阳性对照(含基因工程 H bsAg ), HbsAg 阴性对照( 正常人血清), HbsAg 样品稀释液(含 BSA 缓冲液), 浓缩洗涤液( PBS-T 缓冲液), 底物 A(含 H2O2 ), 底物 B (含 TMB ),终止液(含 H2SO4 ),封板膜,自封袋,说明书。 试剂储存条件及有效期: 2~8 ℃避光保存,有效 12 个月。 3 样本采集: 取静脉血 3-4ml 于干净容器中分离出血清或血浆标本,如不及时测定可臵于 4℃冰箱保存, 如长期保存需臵于-15 至-20 ℃冻存, 并避免样本反复冻融。高脂血、高胆红素及溶血样本可能会影响试验结果的准确性,建议不使用。 4 所需仪器 全自动酶免分析仪 新鲜蒸馏水或去离子水 酶标仪(单波长 450nm 或双波长 450nm/630nm ) 微量移液器 37℃恒温箱或水浴箱 洗板机或洗瓶 5 检验方法 平衡: 将试剂盒各组分从盒中取出, 平衡至室温( 18~25 ℃), 微孔板板开封后,余者即时以自封袋封存。 配液: 浓缩洗涤液配臵前充分摇匀( 如有晶体应充分溶解), 浓缩洗涤液和蒸馏水去离子水按 1: 19 稀释后使用。 编号:取所需数量微孔条固定于支架,按序编号。 稀释:每孔加入 20ul 样品稀释液。 加样:分别在相应孔中加入 100ul 阴、阳性对照血清或待测样本。 温育:臵 37℃温育 60min 。 加酶:分别在每孔中加入酶标记抗体 50ul 。 温育:臵 37℃温育 30min 。 洗涤: 用洗涤液充分洗涤 5次、洗涤后扣干( 每次应保持 3 0~60s 的浸泡时间)。 显色:每孔加入底物 A、B各 50ul ,轻拍混匀, 37℃暗臵 30min 。 终止:每孔加入终止液 50ul ,混匀。 测定: 用酶标仪单波长 450nm 或双波长 450nm/630nm 测定各孔 OD值( 用单波长测定时, 需用空白对照调零), 并记录结果。 6 结果判定与分析临界值( . )的计算:临界值= 阴性对照孔 OD 平均值* ; 阴性对照 OD 均值小于 时以 计算。结果判定: 样本 OD值 S/.>=1 者为 HbsAg 阳性样本 OD值S /.<1 者为 HbsAg 阴性阴性对照均值> 或阳性对照均值< 时, 实验无效, 应重新试验。 7 质量控制每次试验用 HBsAg 的质控血清同步检测, S/CO 值应在控制范围内;如失控,检